斑马鱼行有性生殖,雌雄配子起源于早期胚胎中的原始生殖细胞,原始生殖细胞形成必须有一些基因参与调控,探讨这些调控基因的表达和功能对了解生殖细胞发生过程中的分子机制具有重要意义。vasa基因和gcl基因是生殖细胞发生相关的基因,对动物生殖细胞的形成是必需的。 vasa基因编码的蛋白质有一个DEAD box区域,具有ATP依赖的RNA解旋酶活性。本文利用原位杂交和荧光定量RT-PCR的方法研究了vasa基因在斑马鱼卵母细胞发生过程中的表达。原位杂交结果表明:在卵母细胞生长、发育的过程中,第Ⅱ期卵母细胞的细胞质中vasa mRNA大量表达。随着卵母细胞的生长,第Ⅲ期卵母细胞中的vasa mRNA分布在液泡之间。到第Ⅳ和Ⅴ期,vasa mRNA逐渐向皮层富集,最后定位于皮层区域。荧光定量RT-PCR显示:斑马鱼vasa基因在第Ⅱ期卵母细胞中的表达量最高,第Ⅲ期有所降低,从第Ⅲ期到第Ⅴ期表达量相对恒定。 本文克隆了斑马鱼gcl基因的部分序列。RT-PCR显示:斑马鱼gcl基因在卵巢中有大量表达,在精巢、肝胰脏、肌肉等组织中有少量的表达。原位杂交结果表明:斑马鱼gcl mRNA在第Ⅱ期卵母细胞的细胞质中大量表达,在第Ⅲ期卵母细胞中分布在液泡之间;到第Ⅳ期卵母细胞是定位于皮层区域,在第Ⅴ期卵母细胞定位于卵母细胞的一端。序列对比表明:斑马鱼Gcl蛋白与果蝇、鼠、人、青鳉鱼Gcl蛋白的序列相似性分别为31、73、71、85%。利用软件RNAdraw、DNAstar等分析了斑马鱼gcl基因3′UTR及Gcl蛋白的二维结构。 本文还讨论了vasa基因和gcl基因在卵母细胞的表达与定位在卵母细胞发生过程中的重要作用,以及mRNA定位的机制。