论文部分内容阅读
为了进一步提高猪冷冻精液解冻后的品质，采用手握法采集成年种公猪精液，配制不同的常温稀释液作冻前预处理，经冷冻保存后再用不同的解冻液和解冻方法进行解冻，比较了0.25 mL细管冻精和5 mL大管冻精解冻后的精子活力；此外，还对甘油平衡时间、甘油浓度、液氮面平衡高度进行了研究。结果如下：实验1．猪0.25 mL细管冻精研究使用0.25 mL细管作为冷冻载体对猪精液进行冷冻保存研究。以Zo，BTS，SchonowⅠ液分别作为预稀释液和解冻液，并比较不同的预处理方法及预处理稀释液、解冻液、液氮面平衡高度及解冻温度等对冷冻效果的影响。结果表明，Zo，BTS和SchonowⅠ液作为预稀释液时，预稀释组精液冷冻效果普遍优于不稀释组，而Zo和S液作为预稀释液的效果优于BTS液。而作为解冻液Zo和SchonowⅠ液的效果差异不显著，但两组的解冻效果均优于BTS组。液氮面平衡高度为5 cm时，最适合0.25 mL细管的降温方案。在Ⅰ液中于5℃下平衡效果优于在8℃下平衡。解冻时，于37℃水浴解冻30s效果最好。该研究最终确立优化的猪精液冷冻方案为：精液采集后以等温Zo液进行预稀释，室温平衡1h，加入冷冻Ⅰ液后于5℃水浴平衡1.5 h，再加入冷冻Ⅱ液，使最终甘油浓度为3％，平衡2 h后装管，置于液氮面上5 cm处平衡20 min后投入液氮；解冻时，37℃水浴30s。以此法冷冻猪精液解冻后精子活力可达0.45。实验2．猪5 mL大管冻精研究使用5 mL大管作为冷冻载体对猪精液进行冷冻保存研究，比较不同甘油浓度、液氮面平衡高度与解冻温度对冷冻效果的影响。结果表明，对于猪5 mL大管，3 cm处平衡最为合适，解冻时以52℃水浴解冻40s的效果最佳；2％与3％的甘油浓度对冻后精子活力影响不大。但大管冻精在最优方案下只能得到0.21的活力，冷冻效果明显不及细管冻精。实验3．猪冷冻精液的体外受精试验本实验用0.25 mL细管冻精进行体外受精研究，并与猪鲜精猪进行比较。结果表明冷冻精液体外受精卵裂率和正常16细胞的发育率分别为54.3％和48.2％，与鲜精对照组无明显差异(P＞0.05)。实验4．LDL作为冷冻保护剂的应用尝试对从卵黄中提取低密度脂蛋白(LDL)进行方法学研究，成功从卵黄中提取LDL，并将其应用于精液冷冻保护。从实验结果来看，在应用中未能克服LDL不溶于水的问题，未能成功将LDL作为冷冻保护剂应用于精液冷冻；LDL的添加使用并没有能达到冷冻保护作用；使用简易的富含LDL的卵黄离心液进行冷冻，发现其也没有比普通卵黄表现出更好的冷冻保护效果。