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肾病综合征是以大量蛋白尿、低白蛋白血症、高脂血症和不同程度水肿为主要临床特点的常见肾小球疾病。激素耐药是肾病综合征治疗过程中遇到的棘手问题,如何对激素耐药型肾病综合征(SRNS)极早期诊断以及及时制定治疗方案为临床所期望。 目前尿蛋白质组学已经应用于医学领域的研究,包括肾脏病学研究。但是尿蛋白质组学应用于SRNS的极早期诊断尚未见报道,本研究收集激素使用前的尿液用冷丙酮萃取方法提取尿蛋白,在激素足量规律治疗8周后,根据激素治疗效应分为激素耐药和激素敏感两组。用比较蛋白质组学方法筛选激素耐药肾病综合征尿中差异表达蛋白,对差异表达蛋白进行鉴定和生物信息学分析,并挑选部分差异表达蛋白进行初步验证。 §1 肾病综合征尿双向电泳的建立及差异蛋白筛选 目的 建立儿童肾病综合征尿蛋白组分析所需的固相pH梯度等电聚焦双向电泳相关技术,并分析比较激素耐药型肾病综合征和激素敏感型肾病综合征间差异,筛选出在激素耐药型肾病综合征表达中的差异蛋白点。方法 冷丙酮萃取肾病综合征患儿尿蛋白,去除白蛋白等高丰度蛋白、除盐,以固相IPG pH梯度等电聚焦为第一向,SDS均一胶(T=10%)的垂直电泳为第二向,银染后用PDQuest软件配比分析,筛选差异表达蛋白点。结果 成功获得儿童肾病综合征