论文部分内容阅读
背景:乳腺癌是严重危害女性身心健康最常见的恶性肿瘤之一。缺氧诱导因子HIF-1α(Hypoxia inducible factor1α,HIF-1α)是缺氧条件下的转导调控因子,介导存在于哺乳动物或人体内的细胞适应于缺氧微环境。它通过结合以及调控一些靶基因(缺氧反应元件,HRE)的合成,参与肿瘤细胞增殖和凋亡、肿瘤的侵袭和转移、血管发生等多个方面。上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)是细胞失去上皮表型而获得间质特性。EMT在肿瘤的侵袭转移中发挥重要作用,使肿瘤获得向远处转移的能力。有研究表明 HIF-1α参与细胞增殖、凋亡、分化,还可以影响乳腺癌的发展。Notch信号通路可促进肿瘤发生EMT。低氧是肿瘤微环境标志性特征,但是 HIF-1α及Notch信号通路在低氧诱导乳腺癌细胞发生 EMT和侵袭转移的过程中是否发挥作用以及发挥什么样的作用,目前尚未清楚。 目的:⑴探讨HIF-1α在人乳腺癌细胞MDA-MB-231发生EMT现象中的作用。⑵阐明HIF-1α与Notch信号通路对乳腺癌细胞MDA-MB-231生物学行为的影响,从而为临床提高乳腺癌患者的生存率提供新思路。 方法:①构建MDA-MB-231细胞Ri hHIF-1α载体(由上海百茂生物医药有限科技公司完成),Western blot检测转染前后缺氧环境下HIF-1α、Notch1、E-Cadherin、Beta-Catenin、Vimentin基因的表达。②Cell Counting Kit-8(CCK-8)增殖实验检测HIF-1α对乳腺癌细胞MDA-MB-231生长情况的影响。③Transwell小室基质侵袭实验检测HIF-1α对乳腺癌细胞 MDA-MB-231侵袭能力的影响。④划痕损伤实验观察 HIF-1α对乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移能力的影响。统计学分析采用SPSS22.0统计软件,P<0.05认为差异有统计学意义。 结果:⑴Western blot检测低氧培养条件下 MDA-MB-231细胞、MDA-MB-231-Ri hHIF-1α细胞及MDA-MB-231-Control细胞EMT标志物的蛋白表达水平变化:以β-actin作为内参,分别在低氧培养24h、48h,MDA-MB-231-Ri hHIF-1α细胞与MDA-MB-231细胞相比,上皮标志物E-Cadherin的表达均升高,差异有统计学意义(P<0.05);上皮标志物β-Catenin24h差异无统计学意义,48h表达升高,差异有统计学意义(P<0.05);间质标志物 Vimentin表达均降低,差异有统计学意义(P<0.05);Notch-1表达差异无统计学意义( P>0.05)。⑵在低氧条件下培养 MDA-MB-231细胞、MDA-MB-231-Ri hHIF-1α细胞、MDA-MB-231-Control细胞,CCK-8检测其增殖能力,增殖速度为MDA-MB-231细胞>MDA-MB-231-Control细胞>MDA-MB-231-Ri hHIF-1α细胞,差异有统计学意义( P<0.05)。⑶在低氧条件下培养 MDA-MB-231细胞、MDA-MB-231-Ri hHIF-1α细胞、MDA-MB-231-Control细胞,24h穿膜细胞数分别为:325.75±38.664,194.75±20.337,158.50±46.702个;MDA-MB-231细胞与MDA-MB-231-Ri hHIF-1α细胞的穿膜细胞数差异有统计学意义(P<0.05)。⑷24h MDA-MB-231细胞、MDA-MB-231-Ri hHIF-1α细胞、MDA-MB-231-Control细胞的迁移宽度分别为433.4±199.040,136.7±106.160,207.5±164.011,各组差异有统计学意义(P<0.05);48h的迁移宽度分别是1190.8±141.554、290.2±153.167、395.7±143.807,MDA-MB-231细胞与MDA-MB-231-Ri hHIF-1α细胞迁移宽度差异有统计学意义(P<0.05)。 结论:①缺氧微环境中,HIF-1α可能诱导乳腺癌细胞MDA-MB-231发生EMT现象;②HIF-1α在乳腺癌细胞MDA-MB-231的侵袭转移过程中发挥一定的促进作用。