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本文主要从以下几个部分展开论述: 第一部分 CaMKK2在骨骼肌再生中的功能及机制研究 骨骼肌在运动中发挥重要作用,肌肉相关疾病往往都是与骨骼肌再生能力变差相关,因此,我们需要更加深入地了解肌肉再生的机制,以期提供新的治疗方法。CaMKK2参与了钙/钙调蛋白依赖性激酶级联反应,然而,其在骨骼肌的作用尚不清楚。我们发现CaMKK2表达水平在肌生成、冻伤或蛇毒损害引起的肌肉再生和Duchenne型肌营养不良症等生理或病理条件下改变。CaMKK2过表达可以抑制C2C12细胞的增殖和分化,而抑制CaMKK2可以得到相反的结果。我们还发现,CaMKK2在C2C12细胞中激活AMPK磷酸化。而AMPK抑制剂能减缓CaMKK2过表达对C2C12细胞分化和增殖的影响,而AMPK激动剂可以破除CaMKK2敲减对C2C12细胞的分化和增殖的影响。这些结果表明,CaMKK2在肌肉细胞中作为一种AMPK的激酶,并通过AMPK介导对成肌细胞增殖和分化产生影响。我们的结果还表明,CaMKK2通过AMPK对Cdc2-Tyr15磷酸化,导致肌细胞处于S期阻滞,从而抑制增殖,同时通过AMPK对PGC1α转录的影响抑制肌细胞分化。最后,我们在小鼠肌肉中电转CaMKK2并通过冻伤引起再生,结果表明CaMKK2破坏了肌肉再生,这揭示CaMKK2可以作为治疗肌肉损伤或疾病的一个潜在靶点。我们的研究揭示了CaMKK2作为成肌细胞分化和增殖的负性调节因子的新角色以及新的肌肉再生的分子调控机制。 第二部分 miR-378在肝癌中的功能及机制研究 肝癌是全世界癌症死亡的第三大原因,大多数肝癌为肝细胞癌,肝细胞癌具有细胞增殖加快,易转移且多数基因出现紊乱表达等特点。miRNA的表达失调在癌症的发病机制中起着重要的作用,其可以作为癌基因或抑癌基因参与细胞周期调控、细胞凋亡、炎症和迁移等过程。我们发现在肝癌细胞系中,miR-378表达水平下调。并且miR-378过表达可以抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡。miR-378通过直接结合Grb2 3-UTR,减少Grb2的蛋白水平,从而发挥其抑制肝癌的功能。体内实验表明,miR-378过表达可以抑制裸鼠移植瘤的生长,并且使用DEN诱导肝癌模型中发现miR-378敲除小鼠中肝癌发病更为严重。因此,miR-378在肝癌中作为抑癌基因,可能可以作为一种治疗HCC的潜在靶点。