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目的：研究同型半胱氨酸(homocysteine, Hcy)对体外胎鼠神经干细胞(neural stem cells, NSCs)增殖和凋亡作用的影响,探讨其相关机制。方法：取孕14-16 d胎鼠脑组织,采用机械吹打法获得神经干细胞,利用含有bFGF和EGF因子的无血清培养液培养NSCs细胞。实验分组：将获得的胎鼠NSCs分为4组：①正常对照组(Control组)；②Hcy低剂量组(Hcy-L组)：培养液中添加30μmol/ml的Hcy;③Hcy中剂量组(Hcy-M组)：培养液中添加300μmol/ml的Hcy;④Hcy高剂量组(Hcy-H组)：培养液中添加lmmol/ml的Hcy。大部分细胞培养至增殖第6d,收集进行免疫标记、基因、蛋白及凋亡率的测定,另一部分细胞于增殖第6d,以胎牛血清诱导细胞分化,至第13d对分化细胞进行鉴定。NSCs的鉴定：采用免疫组化法检测神经生物学标记物Nestin、GFAP、β-tublin-Ⅲ, BrdU掺入法检测细胞增殖力；Hcy对NSCs增殖的影响：通过MTT法检测不同浓度Hcy影响下不同时间点NSCs增殖情况,并绘制生长曲线；免疫双标法和5-溴2-脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo 2-deoxyμridine, BrdU)掺入法计算Nestin/BrdU双标阳性细胞占增殖细胞的比例；RT-PCR法检测NSCs增殖相关基因表达的情况；Hcy对NSCs凋亡的影响：利用流式细胞仪单荧光染色法检测NSCs的细胞凋亡率,RT-PCR法检测ERK1/2 mRNA表达情况、Western Blot法检测pERK1/2蛋白表达的情况。结果：从胎鼠脑组织分离以含bFGF、EGF的无血清IMDM培养基培养的、细胞表达NSC特异性标志Nestin抗原,BrdU标记显示为阳性,且可分化成神经元及神经胶质细胞,证明所培养的细胞为NSCs,且具有一定的增殖和自我更新的能力。MTT结果显示：培养48h后Hcy低、中、高剂量组NSCs OD值均低于Control组,且存在剂量-反应关系(P<0.05),说明Hcy能抑制NSCs的增殖；免疫组化双标法结果表明：添加Hcy组Nestin/BrdU双标阳性均低于Control组,差别有统计学意义(P<0.05),且随着Hcy剂量的升高,阳性率下降；NSCs各组Id2、Hes1、Notch1基因的表达都随着Hcy剂量的增加逐渐减低(P<0.05),说明Hcy有可能是通过抑制增殖相关基因如Id2、Hes1、Notch1发挥作用。流式细胞术检测结果显示,Hcy对NSCs的凋亡率有所影响,Control组细胞凋亡率最低,为19.43%,而Hcy-H组最高,凋亡率为25.37%,但差别无统计学意义(P>0.05)；添加Hcy各组能抑制ERK1/2基因及pERK1/2蛋白的表达(P<0.05),且随着Hcy剂量的升高,表达量下降,存在剂量-反应关系。结论：本实验成功的分离、培养胎鼠NSCs,具有NSCs的基本特征,并且具有增殖和自我更新能力。Hcy可抑制NSCs的增殖,其机制可能是与Id2、Hes1、Notchl基因的表达有关。Hcy具有促进胎鼠NSCs的凋亡的趋势,其机制可能通过抑制ERK通路,促进凋亡,抑制NSCs增殖。