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目的:(1)动物实验通过建立睡眠剥夺模型,观测大鼠海马内神经递质谷氨酸、γ-氨基丁酸含量和c-fos蛋白表达,来探讨在多个不同时段睡眠剥夺下海马神经元活性的动态改变和海马对睡眠的调节作用,以研究失眠可能的发生机制。(2)临床研究通过对失眠患者的一般资料,中医证型、体质分布的分析,探求失眠患者体质与证型的相关性,为失眠的辨体质-辨病-辨证型提供依据,从而为失眠的临床防治提供新的思路; 方法:(1)动物实验:将35只成年、雄性、健康wistar大鼠随机分为正常对照组(CC)和模型组,模型组分为睡眠剥夺(SD)12h组(SD12h)、睡眠剥夺24h组(SD24h)、睡眠剥夺48h组(SD48h)、睡眠剥夺72h组(SD72h)、睡眠剥夺96h组(SD96h)及睡眠剥夺24h大平台对照组(TC),每组5只。采用改良多平台水环境睡眠剥夺法(MMPM)建立大鼠的睡眠剥夺模型,观测各组大鼠行为学变化,用光学显微镜观察海马神经细胞形态随时间的变化,免疫组化法观测不同时段海马内神经递质谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)和c-fos蛋白的表达。(2)临床研究:选取门诊及病房符合标准的失眠患者93例,进行一般资料调查、中医四诊信息收集、匹兹堡睡眠指数量表((PSQI)评分、体质判定,进而研究体质的分布情况、证型特点以及体质与证型的相关性; 结果:动物实验:(1)睡眠剥夺后大鼠的一般状态:TC组与CC组相比没有明显差异,大鼠活动灵活,反应快速,体重明显增加,并且毛柔顺光泽。SD12h、24h、48h组表现为精神不振,困倦,经常低头,毛竖起无光泽,常因短暂睡眠而反复跌落水中,惊醒后又爬上平台。SD72h、96h后,大鼠精神萎靡,身体虚弱,消瘦,毛硬粗糙无光泽,呈刺猬状,更容易掉入水中,且对外界声、光等刺激敏感,情绪上容易激惹。(2)不同时段SD后大鼠海马内Glu含量:TC组和CC组Glu的含量相比未见明显变化(P>0.05);SD12h后Glu含量逐渐增高,到48h达到高峰,与CC组相比差异明显(P<0.01),SD12h、24h、48h三组之间有统计学差异(P<0.05);SD48h后Glu含量开始呈下降趋势,与SD24h组相比有统计学意义(P<0.05),与SD72h、96h组相比有统计学差异(P<0.05);SD72h、96h两组间相比无统计学意义(P>0.05)。(3)不同时段SD后大鼠海马内GABA含量:TC组和CC组GABA的含量接近,差异不大(P>0.05);SD12h后GABA含量开始逐渐持续升高,与CC组比较有明显差异(P<0.01),SD12h、24h、48h、72h、96h各组间相比较有统计学意义(P<0.05);(4)TC组和CC组c-fos阳性神经元数目相比较无统计学差异(P>0.05);SD12h后c-fos阳性神经元数目开始明显增多,到48h达高峰,与CC组相比差异明显(P<0.01),SD12h、24h、48h组间差异具有统计学意义(P<0.05);SD48h后c-fos阳性神经元数目开始逐渐减少,与CC组比较差异明显(P<0.01),SD48h、72h、96h组间相比无统计学意义(P>0.05)。临床研究:(1)失眠发病人群特征:年龄构成以中老年为主,女性明显多于男性,脑力劳动者多于体力劳动者,以接受过一定程度高等教育者为多。(2)失眠患者的中医证型特点:以心脾两虚证最多,其次为肝火扰心证、痰火扰心证、心胆气虚证和心肾不交证;心脾两虚证患者以女性为主,而痰热扰心证则以男性为主;急性失眠患者以肝火扰心证和痰热扰心证最多,亚急性失眠患者以心肾不交证、肝火扰心证最多,慢性失眠组以心脾两虚证、心胆气虚证为主。(3)失眠患者的体质特征:本次临床研究的93例失眠患者中,阳虚质最多,其次是气郁质、阴虚质、血瘀质、痰湿质、气虚质、平和质、湿热质、特禀质。(4)失眠患者的证型与体质相关性:失眠的证型与体质分布有一定关系,肝郁化火证与气郁质有关,心脾两虚证与气虚质、阳虚质有关,痰热扰心证与湿热质有关,心肾不交证与阴虚质有关。不同类型体质的失眠患者其中医证型分布有差异,由于兼夹体质的影响两者并非都是一一对应关系。(5)失眠患者的体质与睡眠质量的关系:失眠主症出现最多的三种表现是入睡困难,眠浅易醒,早醒;气虚体质与痰湿体质者主诉症状表现类型最多,湿热体质患者仅表现出难以入睡与多梦;瘀血体质者多有多梦症状,气郁体质者多有眠浅易醒症状。 结论:(1)大鼠海马内的兴奋性递质(Glu)在睡眠剥夺后逐渐增加,于48h达峰;随着剥夺时间的延长增多的程度降低;而促睡眠神经递质(GABA)随着睡眠剥夺时间的延长增高更明显;衡量核团活性的氨基酸比值(Glu/GABA)呈现先增加后降低,表明海马活性增加可能具有促睡眠作用。(2)睡眠剥夺后,大鼠海马内c-fos蛋白阳性细胞表达明显增加,在SD48h时达到最高峰;但随着剥夺时间的延长其表达数量逐渐降低;说明海马兴奋参与了睡眠剥夺后最初睡眠反弹过程。(3)性别、病程长短等因素影响失眠患者证型分布;(4)失眠患者的好发体质为阳虚质、气郁质、阴虚质;(5)不同类型体质的失眠患者其中医证型分布有差异,表现为有一定的趋同性,但由于兼夹体质的影响两者并非都是一一对应关系;(6)失眠患者的体质与睡眠质量存在相关性,除特禀体质外,各类体质失眠患者均易表现出入睡困难的症状,瘀血体质与多梦关系密切,气郁体质与眠浅易醒关系密切;(7)将辨体质、辨病、辨证型三者结合起来,针对不同患者进行个体化治疗,为失眠的临床诊疗提供新的思路。