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背景与目的:肝纤维化是各种慢性肝损伤修复反应的共同病理过程,以细胞外基质的过度积累为特征;活化的肝星状细胞是细胞外基质的主要来源;研究发现促进活化HSCs衰老能够抑制其增殖及分泌细胞外基质的能力,成为逆转肝纤维化的重要策略之一;前期研究显示IL-10能够拮抗CCL4和猪血清诱导的大鼠肝纤维化的进展,但IL-10拮抗肝纤维化的作用是否与活化的HSCs衰老有关,未见报道。本实验的研究目的是探讨IL-10对活化肝星状细胞衰老的影响和潜在机制,阐明其抗纤维化的可能机制。方法:（1）胶原酶灌注和密度梯度离心法分离原代大鼠HSCs,体外培养原代大鼠HSCs,Western Blot法检测Collagen typeⅠ和α-SMA表达,鉴定HSCs的活化状态;（2）IL-10对活化HSCs衰老的影响:原代大鼠HSCs经无血清高糖DMEM饥饿处理后,分为对照组和IL-10处理组,（1）SA-β-Gal染色检测各组β-半乳糖苷酶的活性;（2）流式细胞术检测IL-10对活化HSCs细胞周期的影响;（3）Western Blot法检测各组衰老相关蛋白p53、p21的表达情况;（3）p53/p21信号通路在IL-10促进活化HSCs衰老中的作用:原代HSCs和HSC-T6经饥饿处理后,分为对照组、IL-10处理组、p53药物抑制剂组和两者共同作用组,（1）SA-β-Gal染色检测原代HSCs各组衰老染色阳性细胞数;（2）Western Blot法检测各组活化HSCs衰老相关蛋白表达变化情况;（4）STAT3在IL-10促进活化HSCs衰老的作用:原代HSCs和HSC-T6经饥饿处理后,分为对照组、IL-10处理组、STAT3药物抑制剂组和两者共同干预组,（1）SA-β-Gal染色检测原代HSCs各组衰老染色阳性细胞数;（2）Western Blot检测各组HSCs蛋白STAT3、p-STAT3、p53、p21表达变化情况;（5）IL-10对活化HSCs蛋白p-STAT3表达和分布的影响:原代HSCs饥饿处理后,IL-10干预不同时间段,免疫细胞荧光检测p-STAT3蛋白的分布情况;（2）同样条件下,再以不同浓度IL-10干预原代HSCs和HSC-T6,核质抽提实验提取细胞核蛋白检测细胞核p-STAT3的表达情况。结果:（1）成功分离原代HSCs;Western Blot结果显示,体外培养7d的原代HSCsⅠ型胶原和α-SMA表达量较3d显著增加（p<0.001）;（2）（1）SA-β-Gal染色结果显示IL-10处理组较对照组β-半乳糖苷酶的活性明显增强（p<0.001）;（2）流式细胞周期结果显示IL-10处理组较对照组G1期细胞比例明显增加,S期细胞比例明显减少（p<0.001）;（3）Western Blot结果显示IL-10处理组活化HSCs衰老相关蛋白p53、p21的表达明显上调（p<0.05）;（3）（1）SA-β-Gal染色结果显示,与IL-10处理组相比,p53抑制剂显著抑制IL-10诱导的活化HSCs衰老（p<0.001）;（2）Western Blot结果显示,与IL-10处理组相比,p53抑制剂显著下调p53蛋白的的表达（p<0.001）,其下游分子p21的表达也明显下调（p<0.05）;（4）（1）SA-β-Gal染色结果显示与IL-10处理组相比,STAT3抑制剂显著抑制IL-10诱导的HSCs衰老（p<0.001）;（2）Western Blot结果显示与对照组相比,IL-10处理组STAT3、p-STAT3、p53、p21的蛋白表达明显上调（p<0.05）;而与IL-10处理组相比,STAT3抑制剂显著下调蛋白p-STAT3、p53及p21的表达（p<0.001）;（5）免疫细胞荧光和核质抽提实验结果显示IL-10能够促进细胞内p-STAT3高表达及向核内转移,以24h作用效果明显;结论:IL-10通过STAT3/p53/p21信号通路促进活化的HSCs衰老。