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系统性红斑狼疮(SLE)是一种常见的典型自身免疫性疾病,可诱发全身多系统和多器官的损伤,导致显著的发病率和死亡率。一般认为SLE的发生可能是遗传因素和环境因素共同作用的结果,但具体发病机制尚不明确。随着研究的逐步深入,认为B细胞不仅可以通过分泌自身抗体直接参与SLE的病发机制,还能够通过分泌细胞因子及作为抗原递呈细胞参与SLE的进程,提示B细胞功能紊乱可能是SLE发生及发展中的关键环节。但令人失望的是,目前靶向B细胞治疗SLE仍然没能达到预期的效果。值得注意的是,近来研究发现在SLE的发病过程中B细胞不仅起到致病作用,还能够调节免疫功能而起到保护作用。可是,在SLE具体病理条件下,是否存在B细胞功能的差异而影响靶向B细胞治疗的预期疗效还不清楚。因此,B细胞参与SLE疾病的机制还需要深入研究,以期为临床上治疗SLE提供有效的理论依据。CD1d被认为介导了 B细胞的免疫调节功能。B细胞可通过CD1d识别脂类抗原与恒定自然杀伤T(iNKT)细胞相互作用,参与自身免疫性疾病的进程。虽然许多研究报道B细胞CD1d的表达紊乱与SLE发病是密切相关的,但迄今关于SLE病理条件下何种因素影响B细胞CD1d表达改变尚未见报道;进一步,已知CD1d介导的B细胞免疫调节功能需要脂类抗原的参与,脂类也直接影响SLE病情,但SLE病理条件下B细胞中脂类代谢是否发生改变及其机制仍未阐明。为了解析上述质疑,本论文进行了如下研究:1.SLE病理条件下TLR9信号介导的miR-155及Ets1降低B细胞表达CD1d首先我们分析了 B6.MRL-lprSLE模型小鼠发病时期B细胞中CD1d的表达。结果显示B细胞在SLE病理条件下其CD1d表达下调,这一结果与已经报道的SLE患者B细胞表面CD1d表达下调结果一致。已知Toll样受体(TLR)通路的激活能够调节SLE疾病的进程,我们前期的研究结果也显示TLR通路可通过影响B细胞的功能参与SLE的病理机制。在本研究中我们用TLR9配体刺激B细胞,发现TLR9信号的激活确实可以显著的下调B细胞中CD1d的表达。为了探究TLR9信号下调B细胞表达CD1d的机制,我们依据关于SLE中microRNA(miRNA)表达紊乱的文献报道,检测了小鼠原代B细胞体外刺激后以及不同EBV背景下人B细胞系中miRNA与CD1d的表达,发现miR-155的表达与CD1d表达存在相关性。通过生物信息学预测及实验证明miR-155确实可直接靶向CD1d并抑制其表达。重要的是,我们还发现miR-155抑制CD1d后能降低抗原递呈细胞对iNKT细胞的抗原递呈功能,导致iNKT细胞活化的减弱及IFN-y分泌的减少。此外,我们还发现TLR9信号可通过影响SLE易感基因Ets1进而调节CD1d的表达。这些结果表明,TLR9信号通路介导的miR-155及Ets1表达改变可能是SLE病理条件下B细胞CD1d功能紊乱的原因。2.SLE病理条件下B细胞CD1d表达缺陷可导致B细胞过度活化为了澄清B细胞CD1d表达紊乱对B细胞的影响,我们分析了 B6.MRL-lpr模型小鼠不同发病阶段(6周、16周、21周和26周)下B细胞表面CD1d的表达以及B细胞相应的活化状态,结果表明在模型小鼠发病早期,B细胞表面CD1d表达下调,而后期B细胞表面CD86才明显升高。我们还利用TLR7激动剂—咪喹莫特(IMQ)分别处理正常小鼠7周、10周和13周建立狼疮模型小鼠,发现在小鼠外周血单个核细胞(PBMC)以及脾脏B细胞中CD1d均明显下调于处理早期,而其后CD86明显上调;分析显示B细胞表面表达的CD1d与CD86呈负相关,但这种相关性不存在于DC。进一步,为了确证这种相关性,我们还分析了正常人B细胞,结果表明CD1d与CD86表达的负相关性存在,但不存在于SLE患者来源的B细胞。此外,我们体外实验证实CD1d信号可抑制TLR7信号诱导的CD86表达。这些结果说明,B细胞CD1d表达缺陷可能导致B细胞过度活化,进而加剧SLE进程。3.SLE病理条件下TLR信号影响鞘脂类代紊乱,导致炎症反应增强和病情加剧已知CD1d介导的B细胞免疫调节功能需要脂类抗原的参与,脂类也直接影响SLE病情。为了考察SLE病理条件下B细胞中脂类代谢是否发生改变,我们对已有的SLE患者B细胞基因芯片进行了分析,结果表明SLE病理条件下B细胞中鞘脂类代谢发生了紊乱,表现为鞘脂类代谢通路中以鞘磷脂磷酸二酯酶3(SMPD3)为中心的相关酶分子表达差异;这种差异基因也在SLE模型小鼠脾脏B细胞获得证实。进一步发现TLR信号通路可诱导这些基因在B细胞以及巨噬细胞中的差异表达,而SMPD3的缺陷表达能够增强TLR信号通路,进而诱导促炎细胞因子的表达,但抑制IL-10的产生。我们还发现TLR信号可调节SMPD3的转运以及神经酰胺的水平,从而可能增强TLR信号诱导的炎症反应。这些结果表明,TLR信号导致SLE患者和模型小鼠B细胞中鞘脂类代谢紊乱,这种紊乱可增强TLR信号介导的炎症反应,进而促进SLE的发展。综上所述,本研究发现:(1)SLE模型小鼠B细胞中CD1d表达降低,这种降低归因于TLR9通过诱导miR-155及Ets1表达的调节;(2)在SLE小鼠模型发病早期B细胞表面CD1d下调,提示其可能导致B细胞过度表达CD86,参与SLE进程;(3)在SLE病理条件下B细胞中的鞘脂类代谢紊乱,且这种紊乱与TLR信号密切相关,进而促进SLE的发展。