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目的:通过在肺成纤维细胞内转染F-TrCP-Ecad质粒,观察β-catenin蛋白敲除对TGF-β1诱导的肺成纤维细胞(CCC-REPF-1)活性的影响,探讨β-catenin信号通路在TGF-β1诱导的肺成纤维细胞活化中的作用及其机制。方法:体外培养大鼠肺成纤维细胞(CCC-REPF-1),分为正常组、TGF-β1刺激组、pcDNA3转染加TGF-β1组、F-TrCP-Ecad加TGF-β1组。各组细胞TGF-β1(5ng/mL)刺激48h后,光镜下观察各组肺成纤维细胞细胞形态学的改变;收集细胞采用CCK-8法观察各组肺成纤维细胞增殖情况;Western印迹法检测各组细胞中α-SMA、Fn、E-cadherin的表达;采用RT-PCR技术检测β-catenin途径下游转录产物α-SMA,colⅠ,colⅢ表达。结果:1、光镜下观察肺成纤维细胞:成纤维细胞呈梭型,有较长的突起,胞核呈卵圆形,位于细胞中央,成放射状和栅栏状排列。TGF-β1刺激后,细胞体积明显增大,胞突消失,细胞数量明显增多,细胞间隙变小。F-TrCP-Ecad转染组大部分细胞呈梭型,有较长的突起,细胞间有明显间隙。2、CCK-8法观察各组肺成纤维细胞增殖:与正常组比较, TGF-β1刺激组、pcDNA3转染加TGF-β1组其OD值明显增高,两组比较无统计学差异;F-TrCP-Ecad转染组OD值较TGF-β1刺激组明显减低(P<0.01),与正常组比较无统计学差异。3、Western印迹法检测各组细胞中α-SMA、Fn、E-cadherin的表达:与正常组比较, TGF-β1刺激组、pcDNA3转染组其α-SMA、Fn蛋白表达显著升高, E-cadherin表达显著降低(P<0.01),两组比较无统计学差异;F-TrCP-Ecad转染组较TGF-β1刺激组α-SMA、Fn蛋白表达显著降低,E-cadherin表达显著升高(P<0.01),与正常组比较无统计学差异。4、荧光实时定量RT-PCR检测α-SMA,colⅠ,colⅢ表达:与正常组比较, TGF-β1刺激组、pcDNA3转染组β-catenin途径α-SMA,colⅠ,colⅢmRNA表达增高(P<0.01);两组比较无统计学差异,F-TrCP-Ecad转染组较TGF-β1刺激组α-SMA,colⅠ,colⅢ表达降低(P<0.01),与正常组比较无统计学差异。结论:1、TGF-β1是促进肺成纤维细胞增殖、活化的重要细胞因子,β-catenin途径是TGF-β1发挥作用的重要信号通路。2、β-catenin蛋白敲除载体(F-TrCP-Ecad质粒)通过阻断该信号途径,阻断成纤维细胞转化为其活性形式肌成纤维细胞,同时抑制成纤维细胞释放胞外基质,阻断纤维化进程。