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目的:初步探讨神经-内分泌-免疫网络调节紊乱与肝组织损害的内在关系,部分阐明慢性乙型肝炎的免疫发病机制;观察海珠益肝方对免疫性肝损伤小鼠神经-内分泌-免疫网络的影响,揭示其作用机理,以及祛邪与扶正两种治法对免疫性肝损伤小鼠神经-内分泌-免疫网络的不同干预作用,为临床应用提供科学依据。 方法:1.SPF级雄性昆明小鼠64只,体重22±2g,随机分为8组,正常组8只,模型组11d、18d、25d各8只,海珠益肝方组8只,祛邪组8只,扶正组8只,地塞米松组8只:模型组、海珠益肝组、祛邪组、扶正组、与地塞米松组于实验第1天尾静脉注射BCG200mg/Kg(约5×10~7活菌/鼠),第10天尾静脉注射LPS0.4mg/Kg(约10ug/鼠)。正常组与模型组在实验第1天灌服生理盐水30ml/Kg,每日1次,连续25天。海珠益肝组、祛邪组、扶正组、地塞米松组分别灌服海珠益肝中药、清热解毒祛邪中药、健脾益气扶正中药、地塞米松30ml/Kg,每日1次,连续25天。模型组分别于实验第11天、第18天、第25天各取8只,正常组、海珠益肝组、祛邪组、扶正组、与地塞米松组在第25天各取8只小鼠眼眶采血,处死小鼠,无菌剖腹,取肝、脾、脑垂体等标本。 2.观察各组小鼠肝功能ALT、AST及肝组织病理变化。 3.采用放射免疫法检测各组小鼠脑垂体和外周血中P物质(SP)、血管活性肠肽(VIP)、催乳素(PRL)、促肾上腺皮质激素(ACTH)的含量。 4.分离小鼠淋巴细胞,经佛波醇乙酯(PMA)、离子霉素(Ionomycin)、莫能菌素(Monensin)刺激培养6小时后,收获细胞,利用细胞内细胞因子染色流式细胞术检测Th1/Th2比例。 5.小鼠淋巴细胞经刀豆蛋白A(ConA)刺激培养72小时后,收集培养上清,ELISA法检测培养上清中Th1型细胞因子IL-2、IFN-γ和Th2型细胞因子IL-4、IL-10的水平。 6.应用RT-PCR法分析脾脏T细胞IFN-γ、IL-4mRNA的表达水平。 7.统计方法 计量资料均采用((?)±s)表示,两组之间均数的比较用t检验。 结果:1.在模型组,随着造模时间的延长,肝功能ALT、AST逐渐升高,与正常组比较有显著性差异(P<0.01),与肝组织损害呈平行关系:正常组小鼠肝脏无异常病变,模型组小鼠肝细胞变性肿胀、气球样变、肝细胞坏死、汇管区炎症细胞浸润,随着造模时间的延长,这种变化愈加明显,并有肉芽肿形成,与正常组比较有显著性差异(P<0.01)。2.脑垂体和外周血中SP、PRL含量较正常组逐渐增加,第18天、25天与正常组比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。3.脑垂体和外周血中VIP、ACTH含量较正常组逐渐降低,第18天、25天与正常组比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。4.Th1型细胞因子IL-2、IFN-γ水平博士论文较正常组逐渐升高,ThZ型细胞因子IL一4、IL一10水平逐渐降低,第18天、25天与正常组比较有显著性差异(P<O,05或P<0 .01)。IFN一丫mRNA的表达逐渐升高,与正常组比较有显著性差异(P<0.05或P<0.01),IL一4mRNA的表达逐渐降低,第18天、25天与正常组比较有显著性差异(P<0.05)。Thl细胞的百分率较正常组逐渐升高(P<0.05或P<0.01),ThZ细胞的百分率逐渐下降(P<0.05),而Thl细胞比ThZ细胞的变化更明显,Thl/Th2比值的逐渐升高。5 .SP、PRL的增加和VIP、ACTH的降低与Thl/T hZ的升高存在一定的相关性,但无显著性意义 (P>0.05);肝组织损害随Thl/Th2比值的逐渐升高而逐渐加重,Thl/Th2细胞的失衡与肝组织损害呈明显的正相关(P<0.05)。6.海珠益肝方能够降低脑垂体和外周血中SP、PRL含量,增加脑垂体和外周血中VIP、ACTH含量,抑制Thl型细胞因子的分泌及IFN一YmRNA的表达,促进ThZ型细胞因子的分泌及IL一4mRNA的表达,降低Thl细胞的百分率,恢复Thl/T hZ的比例,对肝组织损害具有保护和改善作用(P<0.05)。7.祛邪组和扶正组表现出相似的作用趋势,祛邪组的作用比扶正组稍明显(P>0.05),但二者均不及海珠益肝组(P>0.05)。 结论:在小鼠免疫性肝损伤发生过程中,存在神经肤类物质SP与VIP、激素类物质PRL与ACTH的分泌紊乱,在免疫系统存在辅助性T细胞亚群Thl/Th2细胞的失衡,以Thl应答占主导地位,神经肤类物质SP和VIP、激素类物质PRL和ACTH的分泌紊乱与免疫系统辅助性T细胞亚群Thl/Th2细胞的失衡存在一定的相关性,Thl/Th2细胞的失衡是小鼠免疫性肝损伤的原因之一。辅助性T细胞亚群Thl/T hZ细胞失衡可能是慢性乙型肝炎的发病机制之一,Thl细胞与病情活动有关,慢性乙型肝炎存在神经一内分泌一免疫网络紊乱。海珠益肝方能够调节神经一内分泌一免疫网络紊乱,恢复Thl/Th2细胞的平衡,对肝组织损害具有保护和改善作用,可能是其作用机理之一。祛邪法和扶正法表现出相似的作用趋势,祛邪法的作用比扶正法稍明显,在病情活动时更适宜采用祛邪法。关键词:海珠益肝方P物质(SP)血管活性肠肤(VIP) 催乳素(PRL)促肾上腺皮质激素(ACTH)IL一2 IFN一Y IL一4 IL一10 Thl细胞ThZ细胞