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目的本实验通过基因芯片技术建立基因功能表达谱数据库,筛选与哮喘大鼠免疫功能相关基因,为白芥子贴治疗哮喘提供实验依据。方法将雄性清洁SD大鼠30只,4~6周龄,体重(150±20)g,按均衡随机法(按体重分层)分为3组,分别为正常组(A组)、模型组(B组)、治疗组(C组),每组实验动物10只。第1天,模型组、治疗组两组分别用新鲜配制的OVA,100mg辅以氢氧化铝凝胶200mg及生理盐水1ml的混悬液在大鼠两腹股沟、后足跖,共4点做皮下注射,每点0.2ml,同时腹腔注射0.2ml,正常组不做任何处理。第15天处死模型组中的5只大鼠,收集并保存需检测部位的标本,以便于确认造模是否成功,其余5只留用作为治疗对照。第15~24天治疗组开始进行白芥子贴贴敷治疗,穴位贴敷前用8%硫化钠在穴位处脱毛,将药丸放在医用脱敏胶贴上,分别贴于大鼠肺俞(双)、定喘、膻中、膏肓(双)处,每天1次,每次贴敷2~4h,贴敷治疗后,将实验组致敏的大鼠置于密闭容器内用超声雾化器雾化吸入1%OVA生理盐水悬液,每天30min,进行激发诱喘1次,连续10天。模型组剩余5只予以空白贴敷,处理方法同治疗组。正常组自由进食常规饲料和水。第25天处死大鼠,采集肺组织标本。进行RNA的提取及鉴定、基因芯片的检测。结果1.哮喘大鼠在行为学以及病理学方面均有明显改变,揭示白芥子贴治疗疗效显著。2.从散点图、火山图中可以得出,正常组与模型组相比,上调、下调基因表达差异显著;模型组与治疗组相比,下调基因表达差异显著;治疗组与正常组相比,上调基因表达差异显著。3.送检9只大鼠的肺组织中提取的基因,将所得基因结果根据基因库等数据进行剔除,按照p<0.05,以基因表达倍数值的绝对值≥2.0为阈值来确定差异表达基因。结果有统计学意义,这些基因与哮喘的发病相关。正常组与模型组差异表达基因结果中,下调基因有:gavor、MTA-TC1900000、MTA-TC0800002、RGD7740611-1、Dbp、blykly、Scd1;上调基因有:Loc100909700、MTA_TC0200000、Ccr3、derchoy、barsar、Srpx、Ccl2、Fcamr、Sele;模型组与治疗组差异基因表达中,下调基因有Sele、Fcamr、derchoy;上调基因有glogey、Mzbl;正常组与治疗组差异基因表达中,上调基因有Loc100909700、Ccr3;下调基因有Dbp,差异基因表达有统计学意义。4.将正常组、模型组和给药组的差异表达基因进行比较,通过热图可以发现,基因的上调下调维持着大鼠的免疫功能,差异有统计学意义,与哮喘有关的上调基因有9个分别是:LOC100909700、Sele、Srpx、derchoy、barsar、Ccr3、Fcamr、Ccl2、MTA-TC0200000;下调的基因有8个分别是:RGD7740611-1、blykly、MTA-TC1900000、gavor、Scd1、Meyflo、MTA-TC0800002、Dbp。结论1.本次实验大鼠在行为学上有明显变化,在病理学改变中,变化显著。研究证明本实验造模成功,经白芥子贴贴敷治疗后,气道免疫-炎症及气道重塑有所改善,白芥子贴贴敷治疗疗效显著。2.差异表达基因的上下调变化,与哮喘免疫学发病机制相符合,其中参与免疫调节的基因有:MTA-TC1900000、RGD7740611-1、Srpx、Fcamr、Ccl2;参与气道免疫-炎症的基因有:Loc100909700Ccr3;参与神经免疫调节的基因有:MTA-TC0800002、参与遗传免疫的基因有:MTA-TC0200000。3.根据实验研究表明,差异表达基因在哮喘时和治疗后差异显著,通过散点图、火山图、热图比较可以发现,大鼠致敏后基因改变明显,参与气道炎症反应的基因原本下调变为上调,参与机体免疫功能的基因原本上调变为下调,部分不表达或低表达基因开始表达;经过治疗后基因上调、下调改变与正常组相一致,但是数值仍有相差,说明白芥子贴有一定的治疗效果,为哮喘免疫方面的治疗研究奠定基础。