论文部分内容阅读
功能性纳米给药系统的设计与评价,旨在克服现有纳米给药系统稳定性差、靶向性不足、不能有效释放药物等缺陷,近年来已成为药剂学领域研究的热点之一。本研究利用肿瘤细胞内外还原型谷胱甘肽(GSH)的浓度差异(100～1000倍),以及肿瘤细胞与正常细胞之间的浓度差异(7-10倍),设计得到还原敏感型的糖脂纳米载体(CSO-ss-SA),并进一步构建A54多肽修饰聚乙二醇(PEG)化的还原敏感型糖脂纳米载体(A54-PEG-CSO-ss-SA)。A54多肽经PEG链接修饰的嫁接物胶束,可延长体内循环时间,提高嫁接物胶束的肿瘤组织靶向分布。二硫键作为糖脂间的桥链,特异性响应肿瘤组织内环境较高的GSH浓度,发生二硫键断裂,迅速释放药物,正常组织内无GSH浓度的响应性,释放药物少,可实现纳米给药系统的高效安全治疗。本研究以3,3-二硫代二丙酸作为交联剂,合成二硫键糖脂嫁接物(CSO-ss-SA),采用碳二亚胺(EDC)偶联法、N,N’-二琥珀酰亚胺基碳酸酯(DSC)为链桥,合成A54-PEG-CSO-ss-SA。A54-PEG-CSO-ss-SA嫁接物可在水性介质中自聚集形成胶束,其数均粒径为50.83±10.4 nm,分布均匀,临界胶束浓度为54.9μg/mL。以阿霉素(DOX)为模型药物,经透析法制备嫁接物载药纳米粒(A54-PEG-CSO-ss-SA/DOX),其数均粒径为48.36±4.3 nm,包封率为77.92%,在10 mM GSH浓度条件下,快速释放包封药物DOX。体外细胞摄取实验结果表明,A54多肽修饰的纳米载体,可加快BEL-7402细胞摄取,增加细胞内的药物浓度。以尼罗红(NR)为模型药物,二硫键链接的糖脂纳米载体(A54-PEG-CSO-ss-SA)细胞内释放速率明显大于非二硫键链接的糖脂纳米载体(A54-PEG-CSO-SA)。 A54-PEG-CSO-ss-SA/DOX的IC50值为1.34±0.58μg/mL,明显低于CSO-ss-SA/DOX及非敏感对照A54-PEG-CSO-SA/DOX给药系统的IC50值,药物细胞毒性提高了0.6-1.0倍。以荷BEL-7402瘤裸鼠为模型动物,A54-PEG-CSO-ss-SA/DiR体内分布结果表明,A54多肽的修饰能够显著增加嫁接物胶束在肿瘤部位的分布,且能够维持较长时间。FITC标记纳米载体,以NR为模型药物,体内药物释放结果表明,A54-PEG-CSO-ss-SA嫁接物胶束能够特异性响应肿瘤组织内较高GSH浓度,快速释放药物,而肝脏组织内基本无药物释放；心脏组织切片的荧光照片显示,A54-PEG-CSO-ss-SA嫁接物胶束在心脏组织内未见有明显分布。模型动物药效学研究结果显示,等剂量的A54-PEG-CSO-ss-SA/DOX嫁接物载药纳米粒,其疗效与市售阿霉素制剂相当,其正常组织内游离药物浓度,以及心脏组织内药物分布,均明显低于市售制剂,具有较高的安全性。本研究结果表明,A54-PEG-CSO-ss-SA嫁接物胶束具有较好的BEL-7402肝癌组织靶向性,在靶细胞内快速释放药物,提高药物疗效。同时,可减少正常组织及心脏的化疗药物毒性,提高用药安全性,是一种具有潜在发展优势的主动靶向纳米给药系统。