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目的:通过体外培养建立青光眼滤过性手术细胞模型,以青光安含药血清进行干预,诱导HTF细胞发生自噬,证明自噬性死亡是青光安对HTF细胞增生抑制的重要机制,为青光安作用机制的研究开拓新领域,并提供实验和理论依据。方法:(1)按随机分组法将20只Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠分成四组,即为青光安10倍组、青光安5倍组、青光安2.5倍组和空白组,各组所取血清分别为高剂量组、中剂量组及低剂量组。(2)取人的Tenon’s囊组织,剪切成约1x1x1mm3大小,组织漂洗干净后在15%FBS的DMEM培养基中恒温培养,细胞达到80%左右时,使用胰酶消化传代,经细胞爬片以及固定完毕后,倒置在显微镜下观察细胞形态,并行波形蛋白免疫荧光鉴定。(3)然后选取3-6代细胞进行实验,实验分为正常对照组、模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,通过加入CCK-8读取酶标仪450nm处的吸光度(A)值,以此来表示不同浓度的青光安含药血清对HTF细胞增生能力的影响,最终以此确定含药血清作用HTF细胞的最适质量浓度。(4)通过TGF-β1诱导HTF细胞变成肌成纤维细胞,构建GFS术后细胞模型。(5)加入青光安含药血清,实验分为正常组(空白组)、TGF-β1组(模型组)、TGF-β1+含药血清组(治疗组)、含药血清组(对照组),用Cyto-ID自噬检测试剂盒,在荧光显微镜下及Cytation5细胞成像多功能仪器检测下观察核周围和细胞质的自噬小体及自噬溶酶体成分呈出现绿色荧光,即自噬阳性细胞,以自噬阳性细胞数所占百分比表示HTF细胞的自噬水平,同时检测自噬阳性细胞的平均荧光强度。结果:(1)完成青光安含药血清制备,选择5倍组中剂量含药血清作为实验的干预浓度。(2)使用组织块培养法,成功培养出人Tenon’s囊成纤维细胞并鉴定完毕。(3)TGF-β1促进HTF细胞的增殖,变成肌成纤维细胞,成功模拟GFS术后细胞。(4)自噬阳性细胞鉴定,24h,空白组、对照组细胞内绿色荧光染色几乎没有,模型组和治疗组细胞内绿色荧光染色少见,与空白组、对照组比较,模型组与治疗组细胞内绿色荧光染色无明显增强,与模型组比较,治疗组细胞内绿色荧光染色无明显增强;48h后,空白组细胞内绿色荧光染色几乎没有,对照组细胞内绿色荧光染色少见,模型组细胞内绿色荧光染色部分可见,治疗组细胞内绿色荧光染色最强,与空白组、对照组比较,模型组与治疗组细胞内绿色荧光染色明显增强;与模型组比较,治疗组细胞内绿色荧光染色增强;72h,空白组细胞内绿色荧光染色部分可见,对照组细胞内绿色荧光染色增强,模型组和治疗组细胞内绿色荧光染色显著增强,与空白组、对照组比较,模型组与治疗组细胞内绿色荧光染色显著增强,模型组与治疗组细胞内绿色荧光染色相差不大;(5)自噬水平检测,结果显示各组自噬程度呈含药血清干预时间依赖型即正相关;(6)自噬阳性细胞的平均荧光强度检测,结果显示各组自噬阳性细胞平均荧光强度呈含药血清干预时间依赖型即正相关;结论:青光安含药血清可促进TGF-β1干预下HTF细胞自噬强度增加,导致细胞自噬性死亡,从而抑制细胞增殖,降低结膜下瘢痕生成,达到青光眼滤过性术后抗瘢痕化作用,同时防止术后再发高眼压,保护视功能,提高青光眼滤过术的成功率。