白细胞介素-2（interleukin-2，IL-2）主要由活化的T淋巴细胞合成并分泌，在免疫系统中它的主要作用是通过结合于T淋巴细胞上的特异性受体刺激T淋巴细胞克隆性增殖等，对机体起着重要的免疫调节功能。 近年来，在中枢神经系统和神经内分泌系统中，发现有IL-2或IL-2样免疫反应阳性物质的表达。例如：有人应用放射免疫法，测出大鼠的正中隆起、弓状核、海马及大脑皮层等脑区有IL-2样免疫活性物质。与此同时，还发现中枢神经系统和神经内分泌系统能够表达IL-2受体（IL-2 receptor，IL-2R）α、β、γ三条链，且不同脑区IL-2R的分布及密度不同。推测IL-2因而发挥不同的生理功能，如IL-2可能具有营养神经元和神经胶质的功能，能够影响神经递质的分泌等。 雌激素主要是由性腺合成及分泌的一种类固醇激素。雌激素与细胞核内特异性雌激素受体结合，发挥核转录因子样作用，调控某些基因的表达水平。业已发现雌激素经典的核受体有两种亚型，即α亚型和β亚型，此二者在各种组织分布及密度迥异，介导 第四军医大学硕土学位论文速效应，推测在细胞膜上可能存在与雌激素结合的结构或受体。雌激素对垂体有重要的反馈调节作用，不仅影响垂体中促性腺激素细胞的增殖和激素分泌，而且对其它腺垂体细胞的增殖和激素的合成以及分泌有重要的作用。 有研究报道，一些鼠源垂体瘤细胞系及人垂体瘤细胞能够表达IL－2及其受体，某些因素如M和PMA能够调控n－2及其受体的表达。有证据显示，正常垂体前叶细胞中存在IL2并表达其受体。正常大鼠垂体前叶不同细胞中IL．ZR表达的密度依次为PRL、ACTH、GH细胞。推测IL2在垂体前叶中可能作为旁分泌或自分泌方式调节垂体前叶细胞的增殖、影响垂体前叶激素及某些活性物质的合成及分泌。 此前，我们实验室以免疫组织化学等方法，发现在大鼠正常垂体前叶有IL－2及其受体的兔疫反应阳性物质，垂体前叶中IL2及其受体的表达有性别差异，雌性大鼠垂体前叶中兀－2及其受体随性周期而表现出一定的规律性。然而，在基因水平，大鼠正常垂体前叶是否有IL－2存在还未见报道。 我们以前的研究还发现，在大鼠垂体前叶某些细胞中有n－2和雌激素受体（ER）兔疫阳性物质共存；IL－2可促进大鼠垂体前叶细胞＊Ra基因的转录活性，而抑制＊邵基因的转录活性；在体条件下，双侧卵巢切除术后，补充雌二醇能够抑制IL．2样免疫阳性物质的表达。在功能研究方面，ILZ对垂体瘤细胞系和人垂体腺瘤细胞的增殖作用受到雌激素的影响，二卜 对正常大鼠垂体前叶细胞的增殖调控作用也受到机体雌激素水平变化的影响。这些研究都提示IL－2和雌激素在调控大鼠垂体前叶细胞功能中有交互作用。 2 第四军医大学硕士学位论文作用。 本次实验目的：从基因水平证实在正常大鼠垂体前叶有IL．2M的表达，及雌激素对 IL－2 W转录的影响。进一步确证IL－2和雌激素在正常大鼠垂体前叶的相互关系。 在以往的研究基础上，本实验采用如下方法： 1．分离正常大鼠的垂体前叶组织，并提取总RNA。 2．正常大鼠垂体前叶进行原代细胞培养5－7天，再从培养细 胞中提取总RNA。 3．将上述提取的总RNA反转录成CDNA，再进行PCR 采 用凝胶电泳的方法回收并纯化所得的PCR产物，通过DNA 序列分析仪检测回收的片段，将检测结果与基因文库比较 来确定是否为IL－2。 4．挑选20只成年雌性大鼠门00＜ 人 随机分成4组，每 组5只。每组按照以下进行实验。 1）正常＋苯甲酸雌H醇组田。） 2）双侧卵巢摘除组＊variectomy3 OVp 3）卵巢摘除＋苯甲酸雌二醇组＊VX＋E。） 4）百巢摘除＋油剂组（OVX＋V） 除第一组不进行手术，其余三组行双侧卵巢切除术， 术后第一组和第三组每日皮下注射苯甲酸雌二醇，第四组 每日皮下注射芝麻油，第二组不进行任何注射。 5．培养两周后，提取垂体前叶的总RNA，初步测定每个样 本的RNA含量，随后取等量的总RNA进行反转录，采用内 对照的方法进行半定量RT－PCR，将结果用分析软件进行分 析。 三 第四军医大学硕士学位论文 结果显示： 1．从正常大鼠垂体前叶组织提取的RNA中，能够用PCR的 方法，得到与n－ZMA某一段相同的片段。 2．从正常大鼠垂体前叶培养的细胞中，同样也能够用PCR 的方法，得到与 IL－2 InRNA某一段相同的片段。 3．正常雌性大鼠行卵巢切除术后，皮下注射雌二醇比单纯 OVX能够显著性地抑制 IL－2 ITnNA的表达。 本研究表明，大鼠正常垂体前叶有IL．2 WA的表达，在体条件下，雌激素能够影响大鼠正常垂