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目的:对案发现场的常见体液（外周血、唾液、精液、月血）准确鉴定可为案件定性和重建提供科学依据。MicroRNA具有组织特异性且不易降解,近年来受到广泛关注,本课题旨在挑选常见体液中的特异性MicroRNA并建立针对这些MicroRNA标记的检测体系和分析方法,从而对体液斑的组织来源进行初步识别鉴定。方法:通过对不同的RNA提取试剂盒比较,确立最适合的提取方法;通过阅读文献挑选不同体液中特异性MicroRNA标记分子,通过优化设计引物、优化反应条件等环节构建基于实时荧光定PCR技术的检测系统;利用本体系对外周血、精液、唾液、月血样本进行检测,所有样本重复检测三次,选取RNU6b为管家基因（Reference Genes,RGs）获得个样本在各条MicroRNA的ΔCt值（=Ct目标基因-Ct RNU6b）,RealTime PCR扩增结果通过QuantStudioTM Real-Time PCR Software v1.3（Thermo Fisher Scientific,美国）输出。MicroRNA的相对表达通过2-ΔΔCt方法计算,然后利用Origin 8.0软件进行分析作图,比较条MicroRNA在不同体液中相对表达的高低,用R v3.2.3进行集合热图分析和主成分分析（Principal component analysis,PCA）,并用R程序包ggplot2画出集合热图以及样本组织属性归类图,并对四个测试样本进行体液类型预测。最后从系统稳定性、系统灵敏度、以及与华大基因和Thermo Fisher实验室结果来验证体系的准确性与可靠性。结果:通过大比较研究建立了基于miRNeasy?Mini Kit的提取方法,可以用于常见体液检材的提取,获得的RNA质和纯度可以满足后续检测,OD260/280值均在2.0左右,其中各个试剂盒的提取效率通过RealTime检测实现判定。实际样本检测根据所获得的ΔΔCt值绘制6条MicroRNA在4种体液中的表达差异图,6条MicroRNA在不同的体液中均展现了不同的表达模式,miR-451a和miR-144-3p在外周血和月血的相对表达明显高于在唾液和精液中的相对表达;miR-888-5p和miR-891a-5p在精液中的相对表达高于在其他体液中的相对表达;miR-214-3p在月血中的相对表达较其他体液较高,与之前的报道一致。但是,miR-205-5p在月血中的表达高于在唾液中的表达,而唾液和精液中的表达差别不大,组织特异性相对较弱,集合热图分析结果与上述结果一致。主成分分析（PCA）图谱显示四种组织来源的样本有明显的聚类趋势,成分1和成分2的累计贡献率达84.5%。由于实际案件中样本非常少,因此检测反应体系对灵敏度的要求较高,实验证明该体系有较好的系统稳定性和灵敏度,并且所得结果与华大基因和Thermo Fisher Scientific结果一致,证实了该反应体系的准确性和可靠性。结论:本研究挑选的MicroRNA标记具有较好的体液（外周血、唾液、精液、月血）区分效能,挑选并优化了适合上述几种体液样本的MicroRNA提取方法,RNA质和产都得到提升,构建优化了检测体系,并且建立数据分析方法,构建的MicroRNA检测体系具有很好的稳定性和灵敏度,以上方法可用于外周血、精液、唾液、月血样本的检测和区分。