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目的腹外侧视前区（ventrolateral preopic，VLPO）是下丘脑视前区重要的睡眠调节脑区，腺苷(adenosine,AD)是目前已知的睡眠-觉醒周期调节的神经体液因子。本研究采用脑立体定位、核团插管、微透析、多导睡眠描计和高效液相色谱法观察两组大鼠的睡眠剥夺前、睡眠剥夺期以及睡眠剥夺后恢复期VLPO内腺苷含量变化。方法1.模型建立雄性成年SD大鼠，清洁级，体重280-320g。戊巴比妥钠（40mg/kg）经腹腔注射麻醉后，安装脑电和肌电电极用于多导睡眠描计，将微透析或微量注射用引导管插入大鼠VLPO区（AP：–0.36mm；L/R：1.30mm；H：7mm）供微透析使用。插管与记录电极均以牙科水泥固定于颅骨上，并将引导脑电和肌电的电极通过导线连接到微型插座上。大鼠术后置于隔音室中恢复一周，记录前一天连接EEG/EMG导线，以予适应记录状态。2.动物分组动物随机分为两组：对照组和睡眠剥夺组。3.微透析实时采集脑脊液术后1周，将微透析探针置入引导管内固定。放置探针1d后开始灌注人工脑脊液（artificial cerebrospinal fluid，ACSF）。采集前2h预灌注ACSF，灌注采集时间为9:00～19:00，对照组和睡眠剥夺组均灌注ACSF，灌流速度为2μl/min，每30min采集一次样品，样品采集后立即放入–80℃冰箱保存。4.大鼠睡眠剥夺方法将大鼠置于有机玻璃桶（22cm，高38cm），从10:00~16:00对睡眠剥夺大鼠每隔15s用毛刷轻轻触碰大鼠臀部，大鼠被强迫保持清醒状态，以此达到睡眠剥夺的目的；对照组不做任何处理。大鼠VLPO区脑脊液微透析实时采集从9:00开始，睡眠剥夺大鼠9:00~10:00为睡眠剥夺前（before sleep deprived，B-SD）期，10:00~16:00为睡眠剥夺（sleep deprived，SD）期，16:00~19:00为睡眠剥夺后恢复（recovery，REC）期。5.腺苷的测定采用高效液相色谱法（high-performance liquid chromatography，HPLC）测定腺苷，进样量10μl，柱温23℃。流动相A为磷酸氢铵（10mmol/L，pH6），流动相B为14%甲醇，流速为1ml/min，用254nm紫外检测。样品浓度计算方法：以腺苷标准品峰面积对腺苷标准品浓度做标准曲线方程，把待测样品峰面积代入方程即可算得待测样品浓度。6.多导睡眠描计及数据分析每次描记均从9∶00开始，连续记录10h。以10s为一分段时间，将睡眠—觉醒周期分为3期：(1)觉醒期（wake, W）：以低幅快波脑电和明显的肌电活动为特征；(2)非快速眼动睡眠期（non-rapid eye movement，NREM）：以睡眠梭形波和高幅δ波为特征，肌电活动明显减少；(3)快速眼动睡眠期（rapid eye movement，REM）：以低幅快波为特征，除偶尔有肌肉抽动外，无明显肌电活动。7.组织学鉴定实验结束后，通过引导管向VLPO区插入单极不锈钢电极。通过电极向微透析或微量注射位点通以2.5mA直流电10s，行阳极毁损，判断探针轨迹底部是否位于VLPO区，仅对定位准确的大鼠实验数据进行统计。8.统计学分析采用SPSS12.0软件进行统计分析，数据以x±S表示，两组均数比较采用t检验，多组均数比较用方差分析，P <0.05为差异有统计学意义。结果1.正常组的W、 NREM、 REM占总时间的百分比分别是37.3±2.4%,59.1±1.8%,3.6±0.7%；对照组的W、NREM、REM占总时间的百分比：B-SD期分别是35.6±3.6%,61.0±2.9%,3.2±0.8%； SD期分别是95.8±1.2%,3.4±0.8%,0.8±0.4%；REC期分别是18.9±4.4%,76.5±5.6%,4.8±1.7%。2.与对照组比较，SD组睡眠剥夺前的W、REM和NREM占总时间百分比无明显变化（n=6，P＞0.05）；而在SD期W占总时间百分比增加58.5%（n=6，P＜0.01），NREM占总时间百分比减少55.7%（n=6，P＜0.01），REM占总时间百分比统计学无显著性差异（n=6，P＞0.05）；在睡眠剥夺后REC期W占总时间百分比减少18.4%（n=6，P＜0.05），NREM占总时间百分比增加17.4%（n=6，P＜0.05），REM占总时间百分比统计学无显著性差异（n=6，P＞0.05）。3. SD组的B-SD期VLPO区腺苷含量为42.90±11.50nmol/L，与正常组的B-SD期36.40±9.98nmol/L相比统计学无显著性差异（n=6，P＞0.05）。SD组SD期VLPO区腺苷的相对含量是199.8±23.5%，与正常组的SD期（142.0±7.0%）相比较有统计学显著性差异（n=6，P＜0.05）。其中，SD组在睡眠剥夺2h内和同时段正常组相比较，VLPO内腺苷相对含量无显著变化；而随后的4h VLPO内腺苷相对含量明显升高。正常组和SD组REC期VLPO区腺苷的相对含量分别为251.7±31.9%,138.3±11.7%，它们之间统计学有显著性差异（n=6，P＜0.01）。其中SD组REC期的1h内VLPO区腺苷相对含量显著性减少。结论腺苷在VLPO内参与睡眠－觉醒周期的调节，可能起促睡眠作用。