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目的观察海马神经元损伤情况及雌激素膜受体G蛋白耦联受体30(G-protein coupled receptor 30,GPR30)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、磷酸化的蛋白激酶B(phospho-Akt,pAkt)及突触后致密蛋白95(Postsynaptic density protein 95,PSD95)在去势合并慢性应激大鼠海马中的表达,了解雌激素保护海马神经元的作用机理。方法选择雌性SD(Sprague Dawley)大鼠,随机分为空白对照组、应激+假手术组、DMSO组、去势+应激模型组、去势+应激+17β-雌二醇共价衍生物(E2-BSA)组及去势+应激+E2-BSA+G15组,每组12只。空白对照组不去势,应激+假手术组和DMSO组只做去势假手术,去势+应激模型组、去势+应激+E2-BSA组和去势+应激+E2-BSA+G15组做去势手术。空白对照组不做侧脑室定位手术,应激+假手术组只颅顶切开皮肤、钻孔,不做侧脑室定位术,DMSO组、去势+应激模型组、去势+应激+E2-BSA组和去势+应激+E2-BSA+G15组做侧脑室定位术。空白对照组和DMSO组大鼠正常饲养,DMSO组每天给予0.5%的DMSO溶液5μL;应激+假手术组、去势+应激模型组、去势+应激+E2-BSA组和去势+应激+E2-BSA+G15组给予慢性不可预知性应激,每天选择一种,同一种刺激不可连续给予,使其不可预知,同时去势+应激+E2-BSA组和去势+应激+E2-BSA+G15组给予相应药物干预,持续28d。旷场实验和2%蔗糖溶液消耗实验用于检测大鼠行为变化,尼氏染色观察海马神经元形态变化,免疫组织化学检测海马GPR30、PSD95和pAkt蛋白阳性表达,Western blot检测海马GPR30、Akt、pAkt及PSD95蛋白阳性表达。结果1旷场实验结果显示:去势+应激模型组与空白对照组和应激+假手术组相比旷场实验得分均减少。给药第四周,去势+应激模型组和去势+应激+E2-BSA+G15组旷场实验得分下降。2 2%蔗糖溶液消耗量结果显示:给药第四周,去势+应激模型组和去势+应激+E2-BSA+G15组2%蔗糖溶液消耗量下降。3尼氏染色显示:去势+应激+E2-BSA组海马神经元细胞形态完整,细胞排列规整,尼氏体较多;去势+应激模型组海马神经元细胞排列散乱,尼氏体减少;去势+应激+E2-BSA+G15组海马神经元形态不完整,染色浅,尼氏体较少。4免疫组化结果显示:(1)GPR30蛋白主要表达在海马神经元胞膜和胞浆内,细胞核内未见。在海马神经元CA3和DG区,与空白对照组比较,去势+应激模型组和去势+应激+E2-BSA+G15组GPR30蛋白表达下降。(2)PSD95蛋白在海马神经元各区,与空白对照组比较,去势+应激模型组和去势+应激+E2-BSA+G15组表达下降;与去势+应激模型组比较,去势+应激+E2-BSA组表达升高。(3)pAkt蛋白在海马神经元各区,与空白对照组比较,去势+应激模型组和去势+应激+E2-BSA+G15组表达下降;与去势+应激模型组比较,去势+应激+E2-BSA组表达升高。5 Western blot结果显示:(1)与空白对照组比较,去势+应激模型组和去势+应激+E2-BSA+G15组GPR30蛋白表达下降。(2)与空白对照组比较,去势+应激模型组和去势+应激+E2-BSA+G15组PSD95蛋白表达下降。(3)与空白对照组比较,去势+应激模型组和去势+应激+E2-BSA+G15组pAkt和Akt蛋白相对表达量下降。结论1 E2-BSA干预可减轻去势合并慢性应激SD大鼠海马神经元的损伤。2 E2-BSA干预可使去势合并慢性应激SD大鼠海马神经元的GPR30和PSD95蛋白阳性表达增加。3 E2-BSA可通过GPR30激活Akt信号通路使PSD95蛋白阳性表达增加,可能是雌激素发挥神经元保护作用的机理之一。