论文部分内容阅读
疫苗佐剂在疫苗的研发中具有重要的作用。由于现代分子生物学技术和基因工程技术及免疫学的应用,人工合成肽段、纯化的重组抗原亚单位和质粒DNA等新型疫苗的研究已取得了初步成果。尽管这些疫苗有很多优越性,然而这些疫苗普遍存在免疫原性弱,难以诱导机体产生有效免疫应答等不足。而传统的灭活疫苗虽然具备了制作工艺简单的特点,但仍存在灭活过程中有可能改变有效的抗原决定簇,产生的免疫应答维持时间不长,且需要多次免疫等问题。因此需要添加佐剂以增强机体对新型疫苗和灭活疫苗的免疫应答,这使佐剂成为当前新型疫苗研究领域的热点。狂犬病是由狂犬病病毒感染所致的人畜共患性传染病。狂犬病一旦发病,患者的病死率为100%。目前狂犬病疫苗是唯一用来控制狂犬病的制剂。狂犬病疫苗在其开发、研制和改进的过程中除了面临病毒的变异、工艺技术与检定方法的改进等难题之外,还存在疫苗效力及需给予多次抗原免疫的问题。因此寻找一种有效的免疫佐剂通过增强狂犬病疫苗免疫应答或改变其免疫应答类型是增强狂犬病疫苗效力并减少抗原多次免疫的策略之一。本研究中选用三种物质：氢氧化锌(Zn(OH)2)、硫酸乙酰肝素(heparan sulfate,HS)和甘露寡糖(Mannose oligosaccharides, MOS)作为新型疫苗佐剂。其中Zn(OH)2是含锌元素的一种无机纳米粒子,在一定条件下能以胶体的形式稳定存在,并具有吸附蛋白抗原的能力。Zn(OH)2作为佐剂与疫苗联合应用,其致敏原性和安全性优于氢氧化铝。HS作为TLR-4的配体,当细胞外基质发生炎症或损伤时,可降解为可溶性低分子量HS。基于Pony Matzinger1994年提出危险信号模式理论,细胞损伤释放的危险信号分子可以激活抗原呈递细胞进而有效的激活T/B细胞产生相应的免疫应答。表明受损细胞释放的危险信号分子HS在免疫应答调控中起着重要的作用,具有潜在的免疫佐剂效应。MOS作为机体内甘露糖受体(MR)可识别的糖分子,通过参与受体介导的内吞作用和吞噬作用,可维持内环境的稳定,并将先天性免疫与获得性免疫联系起来组成机体的一种免疫防御系统。提示甘露寡糖可作为免疫刺激剂诱导特异性的免疫应答。为了研究Zn(OH)2与HS或Zn(OH)2与MOS复合佐剂的对狂犬病疫苗的体液免疫增强效果,分别制备HS+Zn(OH)2复合佐剂和MOS+Zn(OH)2复合佐剂,联合狂犬病疫苗免疫ICR小鼠。Zn(OH)2+HS复合佐剂实验组分别设立生理盐水空白对照组,Zn(OH)2佐剂、HS佐剂、Zn(OH)2+HS复合佐剂1、2、3次免疫组,狂犬病疫苗单纯疫苗1、2、3、5次免疫组。Zn(OH)2+MOS复合佐剂实验组分别设立生理盐水空白对照组,Zn(OH)2佐剂、MOS佐剂、Zn(OH)2+MOS复合佐剂3次免疫组,狂犬病疫苗单纯疫苗3、5次免疫组。各实验组均于初次免疫后1、2、3、4、8、12、16周采集血清,并通过ELISA法检测小鼠血清抗-RABV抗原IgG抗体水平。体液免疫效果结果表明,Zn(OH)2+HS或Zn(OH)2+MOS复合后,均能增强狂犬病疫苗诱导的体液免疫应答。Zn(OH)2+HS复合佐剂1、2、3次免疫组的免疫增强效应及IgG持续时间优于单纯疫苗1、2、3次免疫组；初免后2周,Zn(OH)2+HS复合佐剂2、3次免疫组的IgG水平高于狂犬病疫苗常规5次免疫组3次免疫后的IgG水平(P<0.05)；初免后3周,Zn(OH)2+HS复合佐剂3次免疫组IgG水平与单纯疫苗常规5次免疫组4次免疫后IgG水平相比,显著升高(P<0.05)。Zn(OH)2+MOS复合佐剂3次免疫组IgG水平高于单纯狂犬病疫苗3次免疫组(P<0.05)；初免后2周,Zn(OH)2+MOS复合佐剂3次免疫组的IgG水平高于单纯狂犬疫苗5次免疫组3次免疫后的IgG水平(P<0.05)。提示在免疫初期Zn(OH)2+HS或Zn(OH)2+MOS复合佐剂能显著增强狂犬病疫苗诱导的体液免疫应答。本研究结果表明,Zn(OH)2+HS或Zn(OH)2+MOS复合佐剂均具有显著提高狂犬病疫苗的体液免疫应答的免疫增强效应,且各个复合佐剂实验组心、肝、脾、肺、肾的病理切片结果未见异常。Zn(OH)2+HS或Zn(OH)2+MOS复合佐剂有望开发为人用疫苗佐剂。