透明质酸(hyaluronic acid,HA)又称玻璃酸,由N-乙酰氨基葡萄糖(Glc-Nac)以β-1,3糖苷键与葡萄糖醛酸(GIcA)交替连接而成。由于独特的分子结构和理化性质,透明质酸已在医药、化妆品、眼科、骨科手术等方面得到了广泛的应用。本文采用海洋生物资源—金枪鱼眼,主要对预处理、提取、纯化等阶段进行研究,从而获得透明质酸的最佳制备工艺。首先,将鱼眼解冻后剥得玻璃体,经丙酮脱脂处理,粉碎、减压干燥,得干粉备用;接着,对提取工艺进行优化,优化工艺为:料液比为1:15时,在20℃提取4 h,最终HA的得率为2.46 mg/g干粉。其次,对提取液进行了除蛋白方法的研究。首先,采用了酶解—醇沉的方式去除蛋白,优化工艺为:在提取液(pH 6.0)中,添加0.2%(v/v)的木瓜蛋白酶,60℃酶解2 h,离心后加入3倍体积95%乙醇(含1%乙酸钾)沉淀6 h,蛋白去除率达97.96%。设计了酶膜反应器,并研究了其在透明质酸制备中去除蛋白的效果,结果表明,使用截留分子量为10000的超滤膜,在温度为50℃—60℃,压力为0.15 MPa时进行酶膜反应,在保证HA截留率为60.65%的情况下,蛋白去除率达86.34%。最后,再通过氯化十六烷基吡啶(CPC)沉淀提纯透明质酸。沉淀解离后经过乙醇沉淀、脱水,干燥等步骤,获得精制HA产品。CPC沉淀之后,HA回收率90.42%。最终产品中HA纯度78.36%,蛋白含量为1.48%。最终得到一条工艺简单的透明质酸制备路线,获得了良好的透明质酸产品,为产业化应用打下了基础。