【摘 要】
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牙周炎是一种慢性感染性疾病,牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis）是公认的牙周致病菌之一,是慢性牙周炎活动部位的主要优势菌。在牙周炎的漫长病程中,可能因为先前的细菌或毒力因子的刺激,而使机体对后续刺激的反应性减弱,即产生内毒素耐受（endotoxintolerance）。目前,绝大部分内毒素耐受的研究都是体外的,体内研究多集中于大肠杆菌（Esc
【基金项目】
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国家自然科学基金（81370025）；
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牙周炎是一种慢性感染性疾病,牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis）是公认的牙周致病菌之一,是慢性牙周炎活动部位的主要优势菌。在牙周炎的漫长病程中,可能因为先前的细菌或毒力因子的刺激,而使机体对后续刺激的反应性减弱,即产生内毒素耐受（endotoxintolerance）。目前,绝大部分内毒素耐受的研究都是体外的,体内研究多集中于大肠杆菌（Escherichia coli,E.coli）脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的耐受。作为最重要的牙周致病菌之一,P.gingivalis全菌包含LPS、菌毛、牙龈素等多种毒力因子,其生物学效应比单一 LPS更为复杂。P.gingivalis诱导的耐受对牙周组织免疫炎症反应的影响,目前尚不明确。目的:探讨P.gingivalis全菌诱导的耐受对小鼠牙周组织细胞因子表达谱和局部杀菌功能的影响,并进一步分析巨噬细胞和中性粒细胞在耐受小鼠牙周组织局部杀菌过程中的作用,以期进一步揭示内毒素耐受对牙周组织炎症和免疫反应的影响,明确巨噬细胞和中性粒细胞在其中所扮演的角色。方法:1.将8～10周龄的SPF Balb/c小鼠随机分成3组:空白对照组、非耐受组和耐受组。采用P.gingivalis重复口内给菌,构建小鼠牙周耐受模型。2.收集各组小鼠牙龈组织,采用real-time PCR芯片检测细胞因子表达谱的变化。3.收集小鼠龈下菌斑样本,采用real-time PCR技术检测非附着菌斑中总菌和P.gingivalis数量。4.采用包被氯膦酸盐的脂质体和anti-Ly-6G（1A8）抗体分别耗竭小鼠体内的巨噬细胞和中性粒细胞,同上法构建小鼠牙周组织耐受模型,收集龈下菌斑样本,real-time PCR技术检测细胞耗竭前后,非附着菌斑中总菌和P.gingivalis数量。结果:1.在被检测的89个基因中,与空白组相比,P.gingivalis非耐受组小鼠牙龈组织中,有14个指标表达增高（＞2倍）（P＜0.05）,占总数的15.73%,包括趋化因子配体1（chemokineligand 1,CCL1）、C-X-C族趋化因子配体1（C-X-C chemokine ligand 1,CXCL1）、IL-17a、IL-9、肿瘤坏死因子受体超家族成员13b（tumor necrosis factor receptor superfamily member 13b,Tnfsf13b）等;而 CCL20、Nodal等3个指标表达降低（＞2倍）（P＜0.05）,占总数的3.37%。与非耐受组相比,P.gingivalis耐受组小鼠牙龈组织中CCL20、CCL22等3个指标表达增高（＞2倍）（P＜0.05）,占总数的3.37%,52个指标表达降低（＞2倍）（P＜0.05）,约占总量的58.43%,包括趋化因子家族CCL1、CCL11、IL-16、IL-9、IL-17a、Tnfsf11、Tnfrsf11b 等。2.采用P.gingivalis刺激的非耐受组小鼠龈下非附着菌斑中,细菌总量及P.gingivalis数量均明显高于空白对照组（P＜0.05）;采用P.gingivalis重复刺激后,耐受组小鼠龈下非附着菌斑中的细菌总量及P.gingivalis数均明显高于非耐受组小鼠（P＜0.05）。3.采用包被氯膦酸盐的脂质体耗竭巨噬细胞后,非耐受组小鼠龈下非附着菌斑内细菌总量和P.gingivalis数量均较空白对照组增高（P＜0.05）,但与注射PBS的非耐受组无明显差异（P＞0.05）。而巨噬细胞耗竭的耐受组小鼠龈下非附着菌斑中的细菌总量与P.gingivalis数量与非耐受组无明显差异（P＞0.05）,与注射PBS耐受组也无明显差异（P＞0.05）。采用anti-Ly-6G（1A8）抗体耗竭中性粒细胞后,非耐受组小鼠龈下非附着菌斑内的细菌总量和P.gingivalis数量较空白对照组增高（P＜0.05）,中性粒细胞耗竭的耐受组小鼠龈下非附着菌斑内的细菌总量和P.gingivalis数量较非耐受组增高（P＜0.05）。结论:P.gingivalis诱导的耐受改变了小鼠牙周组织的细胞因子表达谱,进而可能对局部炎症和免疫反应产生影响,这种耐受也降低了局部组织的杀菌功能,巨噬细胞在上述的功能改变中可能发挥了更大的作用。
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