本研究的目的是探讨影响精子分离的因素，初步建立起流式细胞仪分离哺乳动物X精子和Y精子的程序和方法。 采集回来用于实验的精液，经过品质评定后用精子稀释液(TALP)稀释，与Hoechst33342在35℃水浴中孵育染色60 min，染色结束后加入食物色素(FD&C#40)着色去除死亡精子，利用流式细胞仪根据精子核DNA含量的差别将X精子和Y精子分离。 结果发现：在精子分离之前，对黄牛新鲜精液分别进行直接保存、TALP稀释保存、TALP+Hoechst33342染色保存，在0h、4h时活率没有显著差异(P＞0.05)，8h时TALP+Hoechst33342保存的一组活率最低(61％)，与另外两组差异显著(P＜0.05)，24h时新鲜精液直接保存的活率最好(60％)，与另外两组差异极显著(P＜0.01)；用山羊断尾精子调试流式细胞仪，正确定向的断尾精子达到69％，在FL2H上X精子和Y精子分峰情况良好，各自CV均为～1.0％，用标准Beads检测CV达到了1.93％；山羊和水牛活精子染色时，Hoechst33342浓度至少分别为30μg／ml和40μg／ml，才能将DNA饱和着色，经过流式细胞仪分析XY精子DNA时呈现双峰；山羊和水牛的新鲜精液平均精子活率为86％和80％时，在10psi、20psi、30psi、40psi、50psi的鞘液压力下分离之后，平均活率分别为69％、67％、56％、22％、8％和73％、49％、22％、6％、3％，分离后精子的活率随着压力的提高而下降；水牛精子分离之后，利用重分析方法进行了4次分离准确率评定，X精子平均准确率达到94％，Y精子平均准确率达到89％。分离的水牛精子在5℃下保存20h后活率为67％，而在22℃下保存20h后分离精子的活率下降到了49％，二者差异极显著(P＜0.01)。 以上试验结果表明，在目前的系统下已经初步建立起了流式细胞仪分离哺乳动物XY精子的方法和程序。