REV感染对SPF雏鸡免疫器官细胞凋亡及细胞增殖相关因子表达的影响

来源 :东北农业大学 | 被引量 : 6次 | 上传用户:chinababay
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由于禽网状内皮组织增生病病毒(REV)感染导致的免疫抑制特性,现今禽网状内皮组织增生病(RE)对禽养殖业仍造成较大的危害。为了有效降低REV对养禽业的危害,迫切需要了解REV导致雏鸡免疫抑制的详细机制。本研究以1日龄SPF雏鸡为研究对象,将实验动物随机分为REV感染组和对照组。其中REV感染组的1日龄雏鸡于腹腔注射500μL的REV病毒稀释液,对照雏鸡腹腔注射500μL的灭菌生理盐水,于感染后7、14、21、28、35d取材。分别应用PI单染和Anexin V-FITC/PI双染的方法检测雏鸡免疫器官中淋巴细胞周期和细胞凋亡的动态变化、应用CCK8方法检测免疫器官中淋巴细胞增殖功能变化、应用RT-PCR技术检测REV感染后免疫器官中REV拷贝数的动态改变和Cyclin D1、Cyclin E、CDK2、CDK4 mRNA表达水平的变化、应用Western Blot方法检测Cyclin D1、Cyclin E蛋白含量的动态变化。为REV免疫致病机制的阐明和防治(制)提供了重要参考依据,主要结果如下:(1)1日龄SPF雏鸡感染REV后7-28 d,其胸腺中检测到了病毒;脾脏中在在整个实验的7-35 d,均未检测到病毒;而法氏囊在7、14 d两个时间点检测到病毒,其余未检测到病毒。(2)REV感染1日龄SPF雏鸡后14-21 d,其胸腺淋巴细胞凋亡数显著或极显著(P<0.05、P<0.01)高于对照雏鸡;脾脏淋巴细胞凋亡数于21 d显著(P<0.05)高于对照雏鸡;法氏囊于14-28 d显著或极显著(P<0.05、P<0.01)高于对照雏鸡,其他无显著差异(P>0.05)。(3)1日龄SPF雏鸡感染REV后,其胸腺中T淋巴细胞增殖功能于病毒感染后第14-28d与对照雏鸡比较显著或极显著(P<0.05、P<0.01)降低;脾脏T淋巴细胞增殖功能于REV感染后第7 d显著(P<0.05)高于对照雏鸡,21-28 d显著(P<0.05)低于对照雏鸡;脾脏B淋巴细胞增殖功能于REV感染后第21-28 d显著或极显著(P<0.05、P<0.01)低于对照雏鸡;法氏囊B淋巴细胞增殖功能于REV感染后第7 d显著(P<0.05)高于对照雏鸡,21-35 d显著或极显著(P<0.05、P<0.01)降低,其他无统计学差异(P>0.05)。表明1日龄SPF雏鸡免疫器官淋巴细胞增殖能力在REV感染后,总体趋势是前期增强、后降低。(4)1日龄SPF雏鸡感染REV后,其胸腺中淋巴细胞G0/G1期细胞数在第14 d较对照雏鸡显著(P<0.05)升高,S、G2/M期细胞数减少;而28 d则相反;脾脏中淋巴细胞G0/G1期细胞数在第14和21 d较对照雏鸡降低,S、G2/M期细胞数较多,28 d反之;法氏囊中淋巴细胞G0/G1期细胞数在第21 d较对照雏鸡升高,S、G2/M期细胞数减少,28 d相反。(5)REV感染1日龄SPF雏鸡后,其胸腺中Cyclin D1 mRNA表达量在14 d显著(P<0.05)低于对照雏鸡,35 d极显著高于(P<0.01)对照;胸腺中Cyclin E mRNA表达量于7、14 d显著或极显著(P<0.05、P<0.01)降低,21、35 d显著升高(P<0.05);胸腺中CDK4和CDK2 mRNA表达量于14 d显著(P<0.05)降低,28 d时,CDK2 mRNA表达又显著(P<0.05)升高;脾脏中Cyclin D1 mRNA表达量在14 d极显著(P<0.01)高于对照雏鸡,28和35 d显著或极显著(P<0.05、P<0.01)低于对照雏鸡,Cyclin E mRNA表达量于14、21 d显著或极显著升高(P<0.05、P<0.01),28 d极显著(P<0.01)降低;CDK4和CDK2 mRNA表达量分别于7、14 d和14 d显著(P<0.05)升高;法氏囊中Cyclin D1 mRNA表达量在14 d、35 d显著(P<0.05)高于对照雏鸡,21 d、28 d极显著(P<0.05)降低;Cyclin E mRNA表达量于7 d显著(P<0.05)升高,21 d、28 d显著或极显著(P<0.05、P<0.01)降低;CDK4mRNA表达量14 d显著(P<0.05)升高,CDK2 mRNA表达显著(P<0.05)降低,其他无统计学差异(P>0.05)。(6)REV感染1日龄SPF雏鸡后,其胸腺中Cyclin D1和Cyclin E蛋白含量分别在21-28d和14-21 d显著或极显著(P<0.05、P<0.01)低于对照雏鸡,而Cyclin E蛋白含量于35 d时,又极显著(P<0.01)升高;脾脏中Cyclin D1和Cyclin E蛋白含量分别于14-28 d和14-21d显著或极显著(P<0.05、P<0.01)高于对照雏鸡,35 d和28-35 d又显著或极显著(P<0.05、P<0.01)低于对照雏鸡;法氏囊中Cyclin D1和Cyclin E蛋白含量分别于14 d和14-21 d显著或极显著(P<0.05、P<0.01)高于对照雏鸡,28-35 d和35 d显著或极显著(P<0.05、P<0.01)降低。通过上述各项指标的检测,本研究较全面系统的研究了REV感染引起的SPF雏鸡免疫功能抑制与免疫器官中淋巴细胞的细胞周期及细胞凋亡的关系,进一步阐明REV的致病机制,为RE防治提供方向。
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