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中国是世界上最大的水产养殖国,水产品的年产量已经连续五年超过六千万吨,而对虾养殖是水产养殖业的支柱项目。实际养殖过程中,为有效防治鱼虾易患疾病、促进机体快速增长,养殖户普遍存在滥用抗生素的现象,诱导了大量抗性菌株(Antibiotics resistance bacterium,ARB)及抗性基因(Antibiotics resistance genes,ARGs)的产生,对食品安全和公众健康构成极大威胁。研究发现,乳酸菌、芽孢杆菌等微生态菌制剂可显著增强水生动物的免疫力,促进机体增长,且安全环保,可有效降低抗生素的使用。基于此,本研究从南美白对虾肠道中分离乳酸菌和芽孢杆菌,对分离株的抗生素抗性进行研究,筛选对常见检出抗生素无抗性的分离株,评估其在水产养殖业的应用潜力。主要研究结果如下:1、采用传统平板涂布法从对虾肠道中分离得到26株乳酸菌,16株芽孢杆菌。经16S r RNA测序鉴定和系统发育进化树分析:所得乳酸菌聚为3个亚组,4株与乳酸乳球菌乳亚种Lactococcus lactis subsp.lactis同源,2株与台湾乳球菌L.taiwanensis同源,20株与格式乳球菌L.garvieae、乳酸乳球菌L.lactis同源;而芽孢杆菌聚为7个亚组,2株与巨大芽孢杆菌Bacillus megaterium、阿氏芽孢杆菌B.aryabhattai同源,7株与同温层芽孢杆菌B.stratosphericus、短小芽孢杆菌B.pumilus、高山芽孢杆菌B.altitudinis同源,1株与炭疽杆菌B.anthracis、蜡样芽孢杆菌B.cereus同源,3株与贝莱斯芽孢杆菌B.velezensis、枯草芽孢杆菌B.subtilis、特基拉芽孢杆菌B.tequilensis同源,1株与越南芽孢杆菌B.vietnamensis、海水芽孢杆菌B.aquimaris同源、1株与环状芽孢杆菌B.circulans同源,1株同地下芽孢杆菌B.subterraneus、产硫芽孢杆菌B.thioparans同源。2、用最低抑菌浓度(MIC)法,分析7株具有代表性的乳酸菌和13株芽孢杆菌对盐酸金霉素、土霉素、四环素、磺胺吡啶、环丙沙星、庆大霉素、妥布霉素、氯霉素、乙酰螺旋霉素、红霉素的耐受性。结果显示,7株乳酸菌均表现出对四环素的单一抗性。而芽孢杆菌的抗性谱更具多样性。有3株菌对四环素、庆大霉素、氯霉素和红霉素均敏感;5株菌表现出对四环素的单一抗性;4株菌呈双重抗性,可耐受四环素、红霉素;1株菌为三重抗性菌,可耐受庆大霉素、氯霉素和红霉素。欧洲食品安全局(EFSA)对实验所用其他抗生素(盐酸金霉素、土霉素、磺胺吡啶、环丙沙星、妥布霉素、乙酰螺旋霉)没给出明确的MIC界定值。所得菌株对盐酸金霉素、土霉素、环丙沙星、妥布霉素的MIC范围为0.58 mg/L,对乙酰螺旋霉和磺胺吡啶的MIC范围为8-64 mg/L。与抗生素抗性表型相对应的18种ARGs在20株菌中的检出率排序为:磺胺类(95%)>四环素类(54.17%)>喹诺酮类(11.67%)>氯霉素类=大环内酯类(10%)>氨基糖苷类(6.43%)。所有菌株不含一类整合子Int I1基因。3、Bacillus sp.S-R-1、Bacillus sp.T-J-1、Bacillus sp.J-J-1对四环素、庆大霉素、氯霉素、红霉素,均敏感,对磺胺吡啶、盐酸金霉素、土霉素、妥布霉素、环丙沙星的MIC范围为0.5-4 mg/L,对乙酰螺旋霉的MIC分别为32、4、4 mg/L,且不含喹诺酮类、氯霉素类、氨基糖苷类、大环内酯类ARGs、一类整合子基因int I1,满足菌株应用的安全性要求。4、Bacillus sp.S-R-1、Bacillus sp.J-J-1、Bacillus sp.T-J-1在p H 2、牛胆盐浓度为0.3%的环境中暴露3 h相对存活率均大于79%,且同时兼备淀粉酶、蛋白酶和纤维素酶活性。Bacillus sp.T-J-1的迟缓期短,稳定期长,表面疏水性、纤维素酶活性显著高于其余两株菌,可有效抑制拟态弧菌Vibrio mimicus、温和气单胞菌Aeromonas sobria、副溶血性弧菌V.parahaemolyticus ATCC17802、大肠埃希菌Escherichia coli的生长,抑菌圈直径范围为10-15 mm。综合以上各项指标,Bacillus sp.T-J-1是最具开发为水产养殖用,尤其是对虾养殖用的益生菌。