【摘 要】
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丁硫克百威是一种常用的氨基甲酸酯类农药,因为其广泛使用于水果及蔬菜之中,存在农药残留问题,筛选丁硫克百威的降解菌可用于消减食品中的农残,提高食品安全水平。本研究以豆豉为分离材料,采用逐步增加液体培养基中丁硫克百威的浓度对降解菌进行驯化富集,然后进行平板划线获得单菌落,采用高效液相色谱法测定降解菌株在3d、5d、7d时对丁硫克百威的降解率,筛选到14株降解率高的降解菌株。对其中4株降解率高于60%的
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丁硫克百威是一种常用的氨基甲酸酯类农药,因为其广泛使用于水果及蔬菜之中,存在农药残留问题,筛选丁硫克百威的降解菌可用于消减食品中的农残,提高食品安全水平。本研究以豆豉为分离材料,采用逐步增加液体培养基中丁硫克百威的浓度对降解菌进行驯化富集,然后进行平板划线获得单菌落,采用高效液相色谱法测定降解菌株在3d、5d、7d时对丁硫克百威的降解率,筛选到14株降解率高的降解菌株。对其中4株降解率高于60%的丁硫克百威降解菌进行PCR测序及序列比对,其中JJ-1被鉴定为恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida）,JJ-4鉴定为毕赤酵母（Pichia.pastoris）,JJ-5 鉴定为荧光假单胞菌（P.Fluorescens）,JJ-8 鉴定为柑桔青霉（Penicillium citrinum）。论文对这4株菌降解丁硫克百威的影响因素进行了研究。对照丁硫克百威自身降解率,发现菌株JJ-4在pH值5～9之间对丁硫克百威的降解率均超过其本身水解速率。当pH=8时,JJ-4对丁硫克百威的降解率为50.87%,而此时丁硫克百威自身水解速率仅有5.29%,在环境温度25℃～40℃时,JJ-4对丁硫克百威的降解速率是丁硫克百威自身水解速率的2～3倍。以蔗糖作为碳源时JJ-4的降解效果也有小幅提升。菌株JJ-4最适pH为8,最适温度为35℃,以蔗糖作为外加碳源时降解效果最好。在pH=7、30℃条件下,JJ-4对丁硫克百威的降解速率符合一级动力学,拟合方程为 Ct=36.189e0.1009d（R2=0.9912）。进一步对JJ-4（Pichia.pastoris）的丁硫克百威降解酶进行研究。在高浓度丁硫克百威（50mg/L）时,粗酶可在3h内降解86.59%的丁硫克百威,固定化酶可降解92.89%,在低浓度（5mg/L）时,降解效率分别是99.49%、86.24%;实验结果表明毕赤酵母JJ-4的酶可在3h内使丁硫克百威降解至安全限量0.01 mg/L以下。体外模拟消化实验结果表明,在胃部环境模拟中丁硫克百威迅速水解生成克百威后,克百威无水解迹象;而固定化酶可迅速水解丁硫克百威,同时也将克百威水解。气相-质谱（GC-MS）分析结果表明菌株JJ-4（Pichia.pastoris）能将丁硫克百威及克百威一并裂环水解,生成低毒无毒的化合物。
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