夏枯草挥发油抗子宫肌瘤活性及其作用机制研究

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目的:寻找夏枯草挥发油超临界流体(CO2)萃取的最佳提取工艺,并对其化学组成进行表征,进行其抗子宫肌瘤的药效学评价,阐明其抗子宫肌瘤的作用机制,为临床治疗子宫肌瘤创新药物研发提供基础。方法:1)利用超临界流体(CO2)提取装置提取夏枯草挥发油,并对其进行工艺优化。2)利用GC-MS联用仪表征夏枯草挥发油的化学成分。3)利用MTT法对夏枯草挥发油抗子宫肌瘤活性进行筛选以及毒性评价。4)利用双荧光细胞计数仪检测夏枯草挥发油对子宫肌瘤细胞的凋亡和生长周期的影响。5)制备SD大鼠子宫肌瘤模型,考察夏枯草挥发油体内抗子宫肌瘤活性。6)利用TUNEL、PCNA染色法检测夏枯草挥发油对SD大鼠子宫肌瘤细胞的凋亡增殖的影响。7)利用Elisa检测试剂盒检测SD大鼠各组血清中雌孕激素水平。8)免疫组组织化学法检测SD大鼠子宫中雌孕激素受体、Survivin、Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达水平,阐明夏枯草挥发油抗子宫肌瘤的作用机制。结果:1)挥发油是夏枯草的主要成分类型之一,超临界流体(CO2)提取是一种适合于夏枯草挥发油提取的有效方法,获得最佳提取工艺为萃取时间为120 min,萃取压强为25 Mpa,萃取温度为30℃。2)检测到夏枯草中挥发油成为有16种,其中主要成分为角鲨烯(28.03%)、亚油酸(9.96%)、亚麻酸(9.95%)、硬脂酸(6.26%)、油酸(5.51%)。3)体外实验结果表明:夏枯草挥发油具有显著的抗人子宫肌瘤细胞活性,且无药物毒性;其作用机制为促进人子宫肌瘤细胞凋亡,抑制子宫肌瘤细胞在G0-G1期,使细胞不能进入G2期进行DNA复制,从而抑制子宫肌瘤细胞增殖。4)体内实验结果表明:夏枯草挥发油具有显著的抗子宫肌瘤活性,其主要作用机制为夏枯草挥发油明显抑制SD大鼠子宫中雌孕激素受体表达,从而抑制雌孕激素与受体的结合,达到抑制子宫肌瘤细胞增殖的目的;同时夏枯草挥发油也能促进SD大鼠子宫肌瘤细胞凋亡,抑制子宫肌瘤细胞增殖,抑制Survivin、Bcl-2蛋白表达水平下降,促进Caspase-3、Bax蛋白表达水平上升,从而从促进子宫肌瘤细胞发生凋亡。结论:夏枯草挥发油具有明显的抗子宫肌瘤活性,且安全无毒,可以作为一种较为理想的抗子宫肌瘤候选药物。
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