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水稻作为一种重要的粮食作物，在全球粮食生产和消费中占有举足轻重的地位。稻瘟病，对我国所有的稻作区而言都是极为严重的水稻病害之一。从环境保护与农业可持续发展的长远视野来看，培育和合理利用新抗病品种是控制稻瘟病害最经济有效和对环境最安全的手段。因此，针对新抗稻瘟病基因的克隆研究对抗病育种就具有非常重要的现实意义。为了快速准确地克隆粳稻PiNo.4的稻瘟病抗性基因Pita~2，本研究在前期目的基因精细定位、物理作图的基础上，旨在对稻瘟病抗性基因Pita~2候选基因的功能进行初步分析，主要研究结果包括：1)采用传统的多次酶切连接技术构建稻瘟病抗性基因Pita~2三个候选基因Pita~2-1、Pita~2-3、Pita~2-4的RNAi载体，克隆到植物干涉载体pMCG161上，通过测序分析验证成功构建了三个RNAi载体。2)将已构建好的三个RNAi载体通过农杆菌介导的水稻遗传转化转入Pita~2供体品种PiNo.4进行功能验证分析，结果共鉴定出T0阳性转化苗T1Ri10棵、T3Ri16棵、T4Ri22棵。进一步通过qRT-PCR对阳性转化苗进行目标基因的表达分析，结果显示与非转化受体PiNo.4相比，阳性转基因植株的Pita~2候选基因相对表达量均有所下调。由于水稻遗传转化的周期较长，转化苗获得时间较晚。目前已收获T1代的种子，下阶段将对T1代转化株进行稻瘟病的抗性鉴定。3)通过EMS化学诱变处理Pita~2近等基因系日本晴种子NB-Pita~2约20000粒，单株收取突变体种子，共获得M1代约4200份株系，接种Pita~2的无毒稻瘟病菌株研53-33，筛选其感病突变株，现共获得36份感病株系，供作下阶段M2代抗病性鉴定及分子检测。4)以抗性基因Pita~2的近等基因系NB-Pita~2和NB为实验材料，通过实时荧光定量PCR技术研究Pita~2介导的抗性反应中相关基因WRKY45、JAmyb、SalT、HSP90、SGT、RAR1、PBZ、PR1b在接种稻瘟病菌研53-33前后的相对表达量，分析这些基因在Pita~2介导的抗性反应中的表达变化，为研究抗性基因Pita~2参与的信号途径奠定基础。