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目的:1.建立以高良姜素为对照品,测定3味山姜属中药黄酮类成分含量的方法。2.制备3味山姜属黄酮类成分并复制胃溃疡寒证模型,初步探讨3味山姜属中药黄酮类成分对胃溃疡寒证的药效作用。3.复制胃溃疡寒证模型,初步探讨3味山姜属中药黄酮类成分治疗胃溃疡寒证的作用机制与中药“亲缘关系-活性成分-效应”之间的关联规律。方法:1.采用乙醇回流提取法充分提取3味山姜属中药黄酮类成分,以高良姜素为对照品,三氯化铝为显色剂,采用紫外分光光度法对3味山姜属中药黄酮类成分含量进行测定。2.采用1mol·L-1氢氧化钠溶液调节p H值至10~11溶解3味山姜属中药提取物,再以1mol·L-1盐酸溶液调节p H值至1~2使黄酮成分析出,制备3味山姜属中药黄酮类成分,测定纯度及得率,计算提取率。3.取SD雄性大鼠90只,随机挑选10只为空白对照组,其余采用冰乙酸及4℃冰知母水煎液复制胃溃疡寒证大鼠模型。模型复制成功后,分为模型组、阳性药干姜姜辣素组、高良姜、大高良姜、红豆蔻3味山姜属中药黄酮类成分高低剂量组,模型组及空白组灌服0.5%羧甲基纤维素钠水溶液,其余各组灌服相应药物。观察胃溃疡寒证大鼠的行为表征及生理机能(活动及精神状态、毛发、进食量、饮水量、体重变化)。肉眼观察胃组织形态学变化,HE染色观察胃组织病理变化,测定胃液量、胃酸总酸度、胃蛋白酶活力;采用试剂盒方法测定大鼠血清血清中NO、ET、PAF、TXB2、COR含量及胃组织中SOD、H+-K+-ATP酶活力,MDA、GAS、MTL、SS、b FGF、PDGF、6-keto-F1α含量。采用SPSS 24.0进行统计学处理,以P<0.05认为有统计学意义。结果:1.高良姜素线性回归方程为y=54.417x+0.0064,R~2=0.9992。结果表明高良姜素及3味山姜属中药黄酮类成分显色最大波长为415nm,在0~21.6μg·m L-1范围内样品测定具有良好的线性关系,3味山姜属中药样品平均加样回收分别为为102.35%、99.46%、99.18%,RSD值分别为2.00%、2.16%、2.85%,方法准确良好。测得高良姜、大高良姜、红豆蔻3味山姜属中药黄酮类成分含量分别为12.05%、7.54%、8.88%。2.采用碱溶酸沉法对高良姜、大高良姜、红豆蔻3味山姜属黄酮类成分富集后纯度为64.31%、58.99%、59.53%,得率分别为124.1g·kg-1、98.1g·kg-1、118.5g·kg-1,提取率分别为77.58%、66.42%、80.41%。3.3味山姜属中药黄酮类成分对胃溃疡寒证大鼠的药效研究:(1)对胃溃疡寒证大鼠体重变化、进食量、饮水量的影响与模型组大鼠比较,高良姜、大高良姜高剂量组大鼠体重显著增加(P<0.05);大高良姜高剂量组、红豆蔻高低剂量组进食量显著增加(P<0.01或P<0.05),高良姜、大高良姜、红豆蔻高剂量组饮水量量显著增加(P<0.05)。(2)对胃溃疡寒证大鼠毛发及精神状态、肛温的影响与模型组大鼠比较,高良姜、大高良姜、红豆蔻高剂量组大鼠毛发及精神状态恢复(P<0.01或P<0.05);高良姜、大高良姜、红豆蔻高剂量组肛温显著提高(P<0.01或P<0.05)。(3)对胃溃疡寒证大鼠胃液、胃酸p H及胃蛋白酶活力的影响与模型组比较:高良姜、大高良姜高低剂量组、红豆蔻高剂量组大鼠胃液量显著减少(P<0.01或P<0.05),p H值显著升高(P<0.01或P<0.05);高良姜、大高良姜、红豆蔻高剂量组大鼠胃蛋白酶活力显著降低(P<0.01或P<0.05)。(4)对胃溃疡寒证大鼠胃组织病理学切片评分的影响与模型组比较,高良姜、红豆蔻、大高良姜高剂量组病理组织切片评分降低(P<0.01或P<0.05)。4.3味山姜属中药黄酮类成分对胃溃疡寒证大鼠的药效机制研究:(1)对胃溃疡寒证大鼠血清NO、ET、PAF、TXB2、COR的影响与模型组比较:高良姜高低剂量组、大高良姜、红豆蔻高剂量组大鼠血清NO含量显著升高(P<0.01或P<0.05);各给药组大鼠血清ET含量显著升高(P<0.01或P<0.05)。高良姜、红豆蔻高剂量组、大高良姜高低剂量组大鼠PAF含量显著降低(P<0.01或P<0.05)。高良姜、红豆蔻高剂量组、大高良姜高低剂量组大鼠血清TXB2含量显著降低(P<0.01或P<0.05)。高良姜高低剂量组、大高良、红豆蔻高剂量组血清COR含量显著降低(P<0.01或P<0.05)。(2)对胃组织中MDA、SOD、GAS、MTL、SS、H+-K+-ATP酶、b FGF、PDGF、6-keto-F1α的影响与模型组大鼠比较:高良姜高低剂量组、大高良姜、红豆蔻高剂量组大鼠胃组织MDA含量显著降低(P<0.01或P<0.05);高良姜、大高良姜、红豆蔻高剂量组大鼠胃组织SOD活力显著增加(P<0.01或P<0.05)。高良姜高低剂量组、大高良姜、红豆蔻高剂量组大鼠胃胃组织GAS含量显著降低(P<0.01);高良姜高低剂量组、大高良姜、红豆蔻高剂量组大鼠胃组织MTL活力显著降低(P<0.01或P<0.05),高良姜高低剂量组、大高良姜、红豆蔻高剂量组大鼠胃组织SS含量显著升高(P<0.01或P<0.05)。高良姜高低剂量组、大高良姜、红豆蔻高剂量组大鼠胃组织H+-K+-ATP酶活力显著减少(P<0.01或P<0.05);高良姜高低剂量组、大高良姜、红豆蔻高剂量组大鼠胃胃组织b FGF含量显著升高(P<0.01);高良姜高剂量组、大高良姜、红豆蔻高低剂量组大鼠胃组织PDGF含量显著升高(P<0.01或P<0.05)。高良姜高低剂量组、大高良姜、红豆蔻高剂量组大鼠胃组织6-keto-PGF1α含量显著升高(P<0.01或P<0.05)。结论:1.采用高良姜素为标准对照品,三氯化铝为显色剂的紫外分光光度法适用于高良姜、大高良姜、红豆蔻3味具有亲缘关系的山姜属中药黄酮类成分的含量测定,采用碱溶酸沉法能够初步制备出纯度较高的黄酮类成分。2.3味山姜属中药黄酮类成分能发挥对胃溃疡寒证大鼠的药效,改善大鼠毛发、精神及活动、进食、饮水等生理状态,增加体重,降低胃液量、胃蛋白酶活力、增加胃酸p H值,减少胃酸和胃蛋白酶对胃黏膜的侵蚀作用,促使溃疡面愈合。3.3味山姜属中药黄酮类成分发挥功效的作用机制主要为升高NO、SS、b FGF、PDGF含量,降低ET、PAF、TXB2、6-keto-F1α、COR、MDA、GAS、MTL含量,增加SOD活力,减少H+-K+-ATP酶活力。推测其能够增加胃黏膜血流量,减少血栓,改善胃组织血液微循环,调节机体神经内分泌系统平衡,改善机体对食物的应激能力,增加胃黏膜的抗氧化能力,减少胃液分泌以及胃肠活动,抑制H+涌入胃腔,降低胃酸的生成,维持胃黏膜细胞内外离子平衡,增加损伤组织的修复作用,促进溃疡面愈合,通过多种因素调节发挥药效。