Apobec-1重组腺病毒治疗肾性高脂血症的实验研究

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研究目的观察单侧肾切除阿霉素肾病兔ApoB mRNA编辑效率及其血、尿液生化和肾脏病理学改变。研究资料与方法40只雄性6月龄新西兰兔,体重1000±100g,随机分为病例组(n=20只)、假手术组(n=20只)。①病例组:以3%的戊巴比妥30mg/Kg行腹腔注射麻醉,无菌条件下行左肾切除,1w后耳静脉注射阿霉素5mg/Kg,术后12周处死所有兔子留取肾脏及肝脏标本,滤纸吸干后称重,立即用10%中性福尔马林溶液固定,石蜡包埋;②假手术组:以3%的戊巴比妥30mg/Kg行腹腔注射麻醉,只探及肾包膜不切除左肾,1w后耳静脉注射生理盐水5mg/Kg,术后12周处死所有兔子留取肾脏标本,滤纸吸干后称重,立即用10%中性福尔马林溶液固定,石蜡包埋。另分别于试验前(0周)和试验结束(12周)检测血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、24h尿蛋白(24h UPr)及载脂蛋白B-100、载脂蛋白B-48。酶法测定Scr、BUN、TP、Alb;放射免疫法检测血浆ApoB-100、ApoB-48;双缩脲比色法检测24小时尿蛋白浓度;苏木素一伊红(HE)染色观察肾脏病理改变;免疫组化观测肝脏ApoB-100及ApoB-48的组织表达。研究结果①病例组24h UPr和血清Scr、BUN、ApoB-100和ApoB-48显著高于假手术组,而血清TP,Alb则明显降低。②病例组肾脏肾脏肾上皮细胞肿胀,系膜细胞增生、系膜基质增多;肾间质增宽,可见大量炎症细胞浸润。ApoB-100和ApoB-48以肾小球表达增高为主。研究结论单侧肾切除加1周后耳静脉注射阿霉素(5mg/kg)在术后12周可以成功建立肾病模型,具体表现为大量蛋白尿、低蛋白血症和明显的高脂血症,肾脏病理显示局灶性病变及肝脏组织ApoB-100和ApoB-48表达普遍增高。研究目的观察外源性Apobec-1基因导入新西兰兔体内后,肝脏apoB mRNA编辑效率及其对血脂代谢的影响。研究资料与方法60只雄性6月龄新西兰兔,体重1000±100g,随机分为apobec-1腺病毒感染病例组(n=20)、假干预组(n=20),假手术组(n=20),置于代谢笼中饲养。①病例组:以3%的戊巴比妥30mg/Kg行腹腔注射麻醉,无菌条件下行左肾切除,1w后耳静脉注射阿霉素5mg/Kg,术后11周处死每组的半数兔子留取肝脏标本,其余兔子分别通过耳缘静脉注入Apobec-1重组腺病毒,饲养1周,摘除右侧肾脏和肝脏,滤纸吸干后称重,立即用10%中性福尔马林溶液固定,石蜡包埋;②假干预组:以3%的戊巴比妥30mg/Kg行腹腔注射麻醉,无菌条件下行左肾切除,1w后耳静脉注射阿霉素5mg/Kg,术后11周处死每组的半数兔子留取肝脏标本,其余兔子分别通过耳缘静脉注入空白腺病毒,饲养1周,摘除右侧肾脏和肝脏,滤纸吸干后称重,立即用10%中性福尔马林溶液固定,石蜡包埋;③假手术组:以3%的戊巴比妥30mg/Kg行腹腔注射麻醉,只探及肾包膜不切除左肾,1w后耳静脉注射生理盐水5mg/Kg,术后11周处死每组的半数兔子留取肝脏标本,其余兔子分别通过耳缘静脉注入Apobec-1重组腺病毒,饲养1周,摘除右侧肾脏和肝脏,滤纸吸干后称重,立即用10%中性福尔马林溶液固定,石蜡包埋。分别留取处死前后静脉血及24h尿液。研究结果①用药前病例组24h UPr、ApoB-100和ApoB-48、TG及TCH、VLDL、LDL-C显著高于假手术组,而与假干预组相差不大,而用药后24小时病例组尿蛋白较前有所缓解,ApoB-100、TG及TCH、VLDL、LDL-C显著下降,TP明显升高,ApoB-48上升不明显,假干预组及假手术组用药后改变与用药前差别不大。②导入重组腺病毒前后肝脏病理未发现有畸形改变;③Western Blot均显示病例组肝脏组织显著表达Apobec-1和ApoB-48。研究结论Apobec-1重组腺病毒导入可在一定程度上起到降血脂和肾脏保护效应,尚未发现明显肝脏致畸改变。
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