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榆叶梅是蔷薇科李属的八倍体物种,是我国重要的观花灌木之一,其花型丰富,重瓣程度变化极大。前人研究表明MADS-box家族基因是植物花器官发育过程中关键的调控基因,并提出了经典的ABC(D)E模型。目前,榆叶梅花发育相关研究鲜有报道,MADS-box家族基因在榆叶梅花器官发育中的分子调控机制尚不明确。因此,本研究参照拟南芥、金鱼草及榆叶梅近缘种桃、梅等物种的MADS-box基因研究成果,通过同源克隆方法从3个重瓣程度不同的榆叶梅品种‘大花紫’、‘复瓣跳枝’和‘含胭’中得到10个花发育相关的MADS-box基因,并采用实时荧光定量PCR对PtAP1、PtAP3、PtPI和PtAG的表达模式进行了研究。此外,本研究从9个候选内参基因中筛选出适合用于榆叶梅花发育研究的内参基因PtRPL13。主要结果如下: 1.通过同源克隆获得11个TypeⅡ型MADS-box基因,其中3个A类基因PtAP1、PtFUL1和PtFUL2,3个B类基因PtAP3、PtAP3-2和PtPI,1个C类基因PtAG,4个E类基因PtSEP2、PtSEP3、PtSEP3-2和PtSEP4。序列分析表明,每个基因在品种内均存在碱基同义突变、错义突变、插入、缺失等,因此每个基因在同一品种中拥有多个等位基因,在不同品种间每个基因变异位点存在差异。对所有序列的保守基序进行分析,结果表明碱基插入和碱基缺失可能导致基因结构改变。 2.选定内参候选基因9个,即Pt18sRNA、PtTEF2、PtACTIN、PtGAPDH、PtEF1-a-1、PtEF1-a-2、PtEF1-a-3、PtRPL13和PtRPⅡ。采用实时荧光定量PCR检测3个品种不同花芽分化时期和不同花器官部位各候选基因的表达量,筛选出适用于不同榆叶梅品种花器官发育研究的内参基因PtRPL13。 3.对PtAP1、PtPI、PtAP3和PtAG表达模式分析结果表明:B类基因PtAP3和PtPI在‘大花紫’花萼中存在异位表达,但其花萼表型并未发生改变。‘复瓣跳枝’和‘含胭’重瓣花形成机制存在差异,‘复瓣跳枝’重瓣花形成可能主要由PtAP1、PtAP3和PtAG的异位表达及PtPI外延表达引起,而PtAP1、PtPI和PtAG的外延表达及PtAP3的异位表达可能是导致‘含胭’重瓣花形成的主要原因。 本研究从分子水平上对不同品种榆叶梅花发育进行研究,结果表明MADS-box家族基因在榆叶梅花发育过程中起关键调节作用,为榆叶梅的瓣性育种等提供了理论指导依据。