【摘 要】
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PKR-like(PKZ)是近几年发现的一种属于eIF2a激酶家族的蛋白激酶,它的C端由保守的eIF2a激酶结构域组成,同时N端是二个Z-DNA结合域(Za)。为了进一步探索和论证PKZ Za结构域的功
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PKR-like(PKZ)是近几年发现的一种属于eIF2a激酶家族的蛋白激酶,它的C端由保守的eIF2a激酶结构域组成,同时N端是二个Z-DNA结合域(Za)。为了进一步探索和论证PKZ Za结构域的功能,在本文中我们在原有实验条件的基础上设计并合成了GC重复序列和发卡序列的双链RNA。在对于RNA的构象研究中发现RNA平时为A型结构当高盐高温时会形成Z型结构。Za的滴定结果表明PKZ Za结构域不但能够翻转B-DNA到Z-DNA,同时也能够对特定序列的RNA的构象有所影响,不同的是需要在高温下才能得到明显的反应结果。除此之外,我们利用凝胶阻滞实验进一步验证了Za结构域结合并翻转B-DNA。另外,我们获得草鱼肾细胞从而对PKZ的整体功能进行研究,在这个过程中我们主要利用SiRNA干扰技术对PKZ的表达进行一定的抑制后测量细胞的活性和观察细胞的状态。在实验的前期结果充分证明了在IFN、GCRV、Poly(I:C)充分的刺激下细胞内能够产生大量的PKZ蛋白。根据草鱼PKZ的全长序列,我们分别在N端和C端设计了2条具有特异性的SiRNA,实验结果表明在转染之后,PKZ的表达受到一定的影响。在后期实验中通过MTT法检测细胞活性和DAPI观察细胞的状态,实验结果表明SiRNA干扰组的细胞数量和细胞活性都要高于空白组。这些都表明PKZ在细胞体内能够诱导不良的和受感染的细胞凋亡。
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