性别决定和性别分化在脊椎动物系统发育史中是两个重要的过程,高等脊椎动物的性别决定占有重要地位,性别受细胞内遗传物质影响较大。而对于低等脊椎动物,如鱼类,其性腺的分化则还受到环境等多方面的影响。研究鱼类性腺的分化规律对研究脊椎动物进化史和发育史具有重要的意义。暗纹东方纯(Takifugu obscurus)属硬骨鱼纲、辐鳍亚纲、鲈形总目、纯形目、纯科、东方鲀属,是我国重要的养殖鱼类之一,兼具药用和食用价值,养殖前景广泛。本文利用组织学方法,对暗纹东方鲀性腺进行组织学观察,对其仔鱼发育过程中,性腺的形态学变化进行了描述,确定了其性腺分化的关键时间节点。利用分子学手段,对暗纹东方纯性腺分化关键限速酶的编码基因CYP19A进行real-time PCR,确定CYP19A在性腺分化过程中的作用。为进一步的研究奠定基础。对暗纹东方纯仔鱼性腺分化过程进行组织学切片发现：孵化后11d(11dah, day after hatching)仔鱼膀胱基部与直肠之间的体腔膜上出现原始生殖细胞(Primordial germ cell, PGC),细胞体积大,直径约7μm,胞质着色较浅,核大且透亮,核膜清晰、界限明显,约占细胞体积的1／2～2／3,核仁偏位,嗜碱性强,被染成蓝色；14dah时PGCs增多,紧贴于体腔膜与体细胞(Somatic cells,SC生成一对组织突起,该结构即为性腺原基(Gonad anlag, GA); 29dah性腺原基发育成为原始性腺(Primary gonads, PG),若干PGCs被SCs包裹,从体腔膜上游离出来。35dah时性腺已出现分化,部分个体出现原始卵巢腔(Ovarian cavity, Oc);而另一部分个体性腺在40dah时观察到精原细胞(Spermatogonia, Sg),并伴随有裂隙状输精管原基(Spermaduct anlag, Sd)的出现。47dah时原始精小叶和输精管的形成,且在生殖上皮附近及基质中出现了I时相卵原细胞,细胞呈圆形,胞质较少,嗜碱性,被染成浅紫色。直径在17～20μm之间,核染色较浅,核径10～12μm。卵巢与精巢在细胞学上完成分化分别以其性母细胞的出现为标准,时间分别为115dah和81dah,至此,卵巢和精巢才真正完成了分化过程。芳香化酶(P450arom)是细胞色素P450家族中的一员,在鱼类性别分化过程中起到关键性作用,可催化雄烯二酮和睾酮转化为雌酮和雌二醇。以暗纹东方鲀二龄鱼为实验材料,根据已知鱼类的CYP19A序列设计兼并引物,利用PCR技术扩增出芳香化酶编码基因CYP19A的片段,长度为1446bp,发现与其他物种CYP19A cDNA具有86%以上的同源性,具有较高的保守性。而在与CYP19B进行Spidey比对时,发现同源性极低。根据获得的CYP19A基因的序列片段设计real-time PCR引物,对不同发育阶段暗纹东方纯雌雄鱼体内的CYP19A基因表达进行real-time PCR发现：雌鱼体内CYP19A基因表达远高于雄性,这与CYP19A基因的生理特性有密切关系。在雌鱼体内,CYP19A基因的表达在44dah时出现了高峰。结合组织学研究结果,47dah时,PGC正通过有丝分裂进行增殖,且在生殖上皮附近及基质中出现了I时相卵原细胞,说明CYP19A的高度表达,产生了大量的芳香化酶,催化雄烯二酮和睾酮转化为雌酮和雌二醇,参与性腺结构的构建和卵母细胞的生成和发育。但是,随着时间雄性体内的CYP19A表达也有逐渐增高的趋势,可能芳香化酶在雄性发育过程中也具有某些作用,这还需要在将来的研究中进一步的探讨。通过组织学以及分子检测手段,对暗纹东方纯性腺分化时期的性腺发育形态学和CYP19A基因的表达进行研究,掌握了性腺分化关键时期的时间节点,以及CYP19A基因在性别分化时期的调控机制。为以后深入阐释鱼类性腺发育、性腺分化和性逆转等现象的分子机制及基因调控原理增加了证据,也为暗纹东方纯育种工作开展奠定了基础。