癫痫是神经系统疾病中的常见病、多发病，对人类健康具有极大危害。对其发病机制目前尚无统一的看法。但皮层局灶神经元群反复过度的同步放电是癫痫的共同电生理特征。痫性放电是神经元去极化飘移的结果（depolarization shift）。而以发作性放电为特征的癫痫细胞改变依赖膜改变。近来随着对自由基研究深入，发现自由基引起的膜脂质紊乱和过氧化反应能改变膜离子通道的密度和分布，改变阈值而影响Na⁺、Ca²⁺流，使Ca²⁺进入细胞内，从而导致进行性的去极化，出现神经元膜电活动异常。 九十年代以来，国外对松果体激素美拉托宁（melatonin, MT）研究取得了飞跃性进展，发现MT具有神经系统保护作用，并总结出其作用机制如下：（1）清除自由基、抗氧化作用；（2）对中枢神经系统的兴奋性抑制作用：a增强抑制性递质的活性（主要是GABA），b抑制兴奋性递质活性（主要是谷氨酸），c改变膜的通透性，从而改变膜电位及第二信使系统起作用；（3）影响其他激素的分泌，如肾上腺激素。从上述作用机制，我们可以推测MT可能具有抗癫痫作用。本研究拟建立慢性鼠癫痫动物模型，在清醒状态下，观察腹腔内注射不同剂量MT对鼠脑电图（EEG）及行为改变的影响，同时测定MT对FeCL₃引 硕士研究生学位论文起的丙二醛（mafondaldehyde，MDA）含量、超氧化物歧化酶（sup盯oxide dismutase，SOD）活性改变的影响，从而更全面地揭示MT抗癫痈的作用及机制。一、实验方法及分组1．不同浓度MT对动物EEG及行为影响的观察 健康雄性Sprague－Dawley（SD）大鼠32只，体重250－3009。参考Kabuto，以前囱为零点，前囱前2．smm，中线旁Zmm两点为额叶电极放置点（F。、F4点），前囱后6mm，中线旁3mm为顶叶电极放置点 （C3、C’点），枕骨中央为公共电极。注射孔为前囱后！mm，左中线旁lmi。脑电图机电极连接：①左额叶一枕骨（F3—A）；②右额叶一枕骨（F4—A）；③左坝叶一枕骨（3—A）：④右坝叶一枕骨（4—A）。l 周后，微量注射器注入FeCL。液，建立癫痈模型，随机分为4组，每组8只：①对照组：②0．03mm。】从gMT剂量组；③O，lmm川川gMT剂量组；④0．3mmol／kg MT剂量组。 各组连续观察4小时，记录EEG痈性放电潜伏期、痫性放电总时间、＞10秒长程发作次数及动物行为表现。2．脑组织匀浆中MDA含量的测定 健康雄性SD人鼠32只，体重250－3009。随机分为4组，每组8只：①正常组；②生理盐水注射组；③FeCL。组；④FeCL。＋MT组。 注射部位同前，皮层内注射药物后1 小时断头取脑，切取包括注射部位在内的 3 X 3mm的脑组织，0℃生理盐水漂洗，称重后，加入组织块重量 9倍的生理盐水，制成 10％脑匀浆，将匀浆以 6000r／min离心，取上清液进行测定。 方法参照南京建成公司MDA测定试剂盒说明书，采用硫代巴比妥酸法测定 MDA的含量，测定仪器为 72分光光度计。3．脑组织匀浆中SOD活性的测定 取上述 10％浓度上清液加 9倍生理盐水稀释为 1％脑匀浆。方法参照SOD测定试剂盒说明书t以黄瞟吟氧化法测定SOD的活性。测定仪器为 72分光光度计。二、实验结果及讨论 3 硕士研究生学位论文 1．皮层内注射FeCL。制成癫痫动物模型，模型稳定，全部动物出现典型的痫性行为及痈性放电并可记录到清晰的脑电图； 2·0·3mmo／kg、0．lmmol／ks MT腹腔内注射可明显缩短痈性放电总时间、减少长程发作次数。0．3mmol／kg组作用明显强于0．lmmol从g组、0．03mmol／kg组。0．3mmol从g明显延长EEG痈性放电潜伏期。腹腔内注射MT明显降低FeCL。诱导的痈性行为评级； 3．皮层内注射FeCL。可使脑组织MDA含量明显升高，0．3mmo！儿gMT腹腔内注射大大降低脑组织MDA含量，但仍明显高于正常组。皮层内注射 FeCL。不影响 SOD活性，腹腔内注射 0．3mmol／kg MT可使SOD活性提高。 本研究显示腹腔内注射MT具有桔抗FeCL。诱导的痫性活动及痈性放电作用，且抗痈作用呈剂量依赖性。其抗痈作用机制是多方面的，强有力的清除自由基、抗氧化作用可能是其中的一个方面。 另外，本研究同时证实FeCL。诱导的癫痫动物模型十分稳定，可作为癫痈研究的重要实验l：具。