大豆ABC转运蛋白基因的克隆及响应铝和重金属胁迫的表达分析

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土壤的重金属污染和铝污染严重影响了植物的生长发育,而植物在进化过程中也形成了相应的抗性机制,以适应环境的变化。近年来,植物抗重金属或抗铝胁迫机制尤其是分子机制的研究取得了一定的进展,已经鉴定出多种抗胁迫的基因家族或蛋白质家族。本课题即以本实验室前期研究工作中发现的大豆(Glycinemax L.Merr.)耐铝候选蛋白ABC转运蛋白为切入点,进一步克隆了该蛋白的编码基因,并以大豆(耐铝品种BX10和铝敏感品种BD2)为材料,进行了该基因响应铝和重金属胁迫下的表达分析,结果如下:   (1)通过RT-PCR方法获得了大豆ABC转运蛋白基因的中间片段。BLASTX比对发现该片段与ABC转运蛋白基因家族中某些成员的片段序列高度同源,且与Genbank中已报道的GmPDR12(No.AM261476)的相应片段完全一致,为该蛋白编码基因的表达分析及全长克隆奠定了基础;   (2)成功克隆了大豆ABC转运蛋白基因的全长。ORF分析显示该基因编码一个含1445个氨基酸残基的蛋白质,且进一步的蛋白质保守域分析、Domain分析以及亚细胞定位分析显示该基因属于ABC转运蛋白基因家族PDR亚家族的成员,定位于细胞膜上,这为该基因的功能研究奠定了基础;   (3)分析了大豆ABC转运蛋白基因在重金属和铝分别处理下的表达模式。3种不同浓度的重金属(铜、铅、镉)分别处理大豆BX106h后,其ABC转运蛋白基因均出现“应激表达”现象,但对于不同的重金属具有不同的浓度依赖性,而在对照组均不表达;单浓度的铜、铅、镉及铝分别处理大豆BX10和BD2后,发现ABC转运蛋白基因表现出不同的随时间变化的表达模式。   本课题的研究为鉴定大豆ABC转运蛋白基因的抗重金属和抗铝胁迫功能奠定了基础,也为植物抗重金属或抗铝分子机制的研究提供了新的思路。
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