基于PI3K/Akt信号通路的复肾煎对肾缺血再灌注损伤保护作用的临床与实验研究

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目的:通过临床观察及动物实验研究,观察复肾煎治疗肾缺血再灌注导致的急性肾损伤的临床疗效及作用机制,阐明中医在肾缺血再灌注损伤治疗中的特色和优势及其作用机理。方法:(1)临床试验:将符合纳入标准的60例病例随机分为试验组和对照组,对照组给予西医对症治疗,试验组在西医对症治疗的基础上给予复肾煎治疗,两组疗程均为4周。观察两组患者治疗前后Cys-c、Scr、UREA、e GFR、TP、ALB、24HUPRO、中医证候积分、中医证候疗效等的变化。(2)动物实验:SPF级SD雄性大鼠80只2周洗脱期后随机分为4组:1.假手术组(shame组),2.实验组(复肾煎组),3.模型组(IR组),4.对照组(WT组),每组20只。采用预先给药的方式,除实验组每日给予复肾煎浓缩液灌胃外,其余三组均给予生理盐水灌胃,共2周。4组大鼠中模型组、实验组采用肾IR模型复制方法造模。shame组游离双侧肾蒂血管后不作结扎,其他处理同IR组。WT组不做处理。假手术组于48h时点处死动物,取血同时获取肾脏组织。检测Scr和Bun、血清Cys-c、β2-MG含量水平。TUNEL法检测肾小管上皮细胞的凋亡情况。磷酸化Akt、磷酸化Bad、Bcl-2采用Western blot法测定的蛋白的定量表达,Caspase-3、Caspase-9采用免疫组织化学法检测。结果:(1)临床试验:最终剔除3例,两组共纳入57例。两组治疗后比较,Scr和e GFR、中医证候积分有显著统计学差异(<0.01),Cys-c、UREA具有统计学差异(<0.05);中医证候疗效方面,试验组有效率为96.55%、对照组为78.57%,两组比较具有显著统计学差异(<0.01);TP、ALB、24HUPRO两组治疗后差异不大。说明试验组在保护患者肾功能、改善临床症状方面,疗效优于对照组,在改善TP、ALB、24HUPRO方面,试验组与对照组疗效相近。(2)动物实验:WT组与shame组在Scr、Bun、Cys-c指标上,无统计学差异,说明手术不对实验结果造成影响。Scr、TUNEL、P-Akt、P-Bad、Bcl-2及Caspase-9结果示shame组与IR组相比,统计学意义显著(<0.01),Bun、及Caspase-3结果示shame组与IR组相比较具有差异(<0.05),说明造模成功。复肾煎大鼠HE染色结果优于IR组,同时复肾煎组在降低Scr、BUN、减少凋亡指数、提高P-Akt、P-Bad、Bcl-2表达、减少caspase-9表达方面较IR组具有显著优势与统计学差异(<0.05)。结论:(1)复肾煎治疗气虚瘀浊证AKI具有良好效果且安全无副作用,可以保护肾功能、改善实验室指标、缓解中医临床症状。(2)复肾煎可以很好保护IR大鼠的肾脏结构与功能,其作用机制推测可能是通过提高PI3K/Akt信号通路中P-Akt、Bcl-2、P-Bad表达、降低caspase-9表达来实现。
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