自1954年人工血管研制成功使血管外科得到迅猛的发展，但由于人工血管腔面缺乏内皮细胞层，影响了其远期通畅率，使得人工血管在大动脉的代用方面取得满意的效果，然而在中、小动脉和静脉外科上，尚难以满足临床需要。因而将内皮细胞种植于人工血管表面使之成为生物化血管是人们追求的目标。但自体内皮细胞来源的缺乏阻碍了生物化人工血管的研制，既往采用手术获得内皮细胞的方法数量少且创伤大，难以应用临床。血管内皮细胞和造血干细胞是由共同的祖细胞分化而来，这种内皮细胞的祖细胞表达CD₃₄⁺抗原，具有高增殖性。骨髓中也含有此种细胞，在体外一定的条件下，骨髓内皮细胞的祖细胞能被诱导而分化为内皮细胞。 本实验拟抽取犬的骨髓，经免疫磁珠分离系统，分离出CD34⁺细胞（内皮细胞祖细胞），CD34⁺细胞经VEGF诱导分化为内皮细胞，再将细胞种植人造血管，植入犬的主动脉和下腔静脉。术后6、8周取出行免疫组织化学鉴定和电镜扫描，明确人工血管通畅率和腔面内皮细胞生长情况，以解决人工血管内皮化种子细胞来源问题，为生物化人工血管的研制开创了新思路。 一、方法 本实验采用杂种犬15只（实验组12只，对照组3只）。 将犬腹腔麻醉，从犬髂骨处抽取骨髓，肝素抗凝。将采集的骨髓用Ficoll液分离获单核细胞，MiniMACS分离出CD₃₄⁺细胞，流式细胞仪测定CD₃₄⁺细胞纯度。CD₃₄⁺细胞在IMDM液中培养，内皮细胞生长因子（VEGF）诱导CD₃₄⁺细胞定向分化为内皮细胞，免疫细胞化学和透视电镜鉴定。将培养细胞种植于PTFE人工血管，再植入犬的下腔静脉和腹主动脉，6、8周后取材观察人工血管通畅率和内皮化情况。二、结果卫、经免疫磁珠分离后，流式细胞仪测定，分离后的细胞中CD34“细胞平均41．84士3．65 O／OO／O。2、内皮细胞生长及鉴定 倒置相差显微镜观察：从骨髓中分离的CD3／细胞为圆形细胞，CD3／细胞经培养24h48h后，可见大部分细胞贴壁，第3－4天开始圆形细胞转化为卵圆形贴壁内皮细胞，细胞呈典型的“鹅卵石”，5－7天出现十余个细胞集落。2周时内皮细胞长满瓶底并达到增殖高峰，细胞呈“铺路石”状排列。 免疫细胞化学结果：第14天时，VI工1因子，CD。抗原均为阳性。胞浆染成棕黄色，内有大量的颗粒状阳性信号表达。 透射电镜下：在培养细胞胞浆内可见We i belPalade小体。3、内皮细胞种植人工血管电镜观察 扫描电镜下，内皮细胞平铺于人工血管表面，成单层排列，细胞排列无轴向性。4、组织标本观察 6周取材9根人工血管，8周取材6根人工血管（第6周取材动脉2根，静脉4根和对照组3根，第8周取材动脉2根，静脉4根）。大体林本检查，人工血管的新内膜均己完全覆盖腔面，其表面光滑，呈半透明状，偶有血栓附着。6周取材的1根（静脉）人工血管管腔明显狭窄，达60％；8周取材的1根（静脉）人工血管管腔闭塞。对照组3根人工血管均在6周取材，其中2根（静脉）己闭塞，1根（动脉）虽通畅但管腔明显狭窄，达70％。总体人工血管植入动脉通畅率100％，人工血管植入静脉通畅率87．50％。 HE染色光镜下可见人工血管的新生内膜组织结构排列有序，其腔面为扁平的内皮细胞层。用 Vlll因子和 CD．；；抗原染色，见内皮细胞层棕黄色染色。 扫描电镜观察：人工血管的新内膜大部分覆以内皮细胞层，这些细胞排列整齐，细胞走行与血管长轴一致。 3三、结论1、骨髓经免疫磁珠分离系统可分离出CD．；。”细胞，CO．；。“细胞经VEGF诱导可定向分 化为内皮细胞。2、骨髓CD。。”细胞经体外培养种植于PTFE人工血管，获得理想的内皮化和通畅率。3、骨髓CD．；．．“细胞可作为人工血管内皮化的种子细胞来源。