目的：1.建立温性经筋通贴膏的薄层鉴别方法,完善质量标准。2.建立温性经筋通贴膏中补骨脂素、异补骨脂素、盐酸小檗碱含量测定方法,进一步提高质量控制标准,同时为温性经筋通贴膏的体外释放及透皮性能奠定含量测定方法基础。3.对温性经筋通贴膏中补骨脂素、异补骨脂素、盐酸小檗碱从基质骨架材料释放的特性进行研究。4.对温性经筋通贴膏中补骨脂素、异补骨脂素、盐酸小檗碱透皮特性进行研究。5.制备缺冰片、氮酮的温性经筋通贴膏,研究处方中冰片、氮酮对补骨脂素、异补骨脂素、盐酸小檗碱透皮性能产生的影响。方法与结果：1.通过参考《中国药典》(2010年版)和成方制剂的鉴别方法,我们对温性经筋通贴膏处方药味的薄层鉴别方法进行了研究,经过反复试验和坚持不懈的探索,最终建立了方中补骨脂、关黄柏、冰片、大黄、黄芪的薄层鉴别方法,方中其他药味由于阴性存在干扰或者方法耐用性能欠佳,未能确定薄层鉴别方法。2.采用双波长HPLC法,通过反复实验,我们建立了同时测定补骨脂素、异补骨脂素、盐酸小檗碱的HPLC方法：采用Inertsil ODS-SP C18柱(4.6mm×150mm,5μm)色谱柱；以乙腈-0.1%磷酸溶液(25：75)为流动相；流速为1.0 mL/min；柱温为30℃；进样量10μ L；检测波长为246nm(补骨脂素、异补骨脂素)、345nm(盐酸小檗碱)。结果显示,温性经筋通贴膏含量测定的标准曲线中补骨脂素、异补骨脂素、盐酸小檗碱均在0.8-48μg/mL的范围内线性关系良好,回归方程分别为：Y=72355.0X+28120.0(r =0.9995),Y=78893.4X+12795.2(r=0.9999),Y=39918.4X+4128.01(r=0.9999)；接收液含量测定的标准曲线中补骨脂素、异补骨脂素、盐酸小檗碱均在0.05-6.0 μg/mL的范围内线性关系良好,回归方程分别为：Y=78608.6X-301.617(r=0.9999), Y=84889.7X+161.986(r=0.9999),Y=43611.3X-1363.93(,=0.9999),平均回收率分别为101.80%(RSD=2.84%),100.61%(RSD=3.84%),99.12%(RSD=3.67%).3.根据被测成分的性质对温性经筋通贴膏体外释放和透皮实验所用的接收液种类进行了筛选,采用直立式Franz改良扩散池,以贴膏膏体面直接接触接收液的方式,通过测定不同时间点接收液内成分的含量,计算24h累积透过百分率,以Higuchi方程的拟合度(相关系数)为指标,选取拟合度最佳的接收液种类。结果表明,含20%乙醇的生理盐水样品的拟合度最高,释放速率也相对较高,定为温性经筋通贴膏体外释放和透皮研究的接收液。其中补骨脂素、异补骨脂素、盐酸小檗碱的24h累积释放率分别为：47.58%,44.14%,31.64%；平均释放速率分别为：10.7309μg.cm-2.h-1,6.5292μg·cm-2·h-1,7.2532μg·cm-2·h-1。4.参照体外释放实验,采用健康SD大鼠腹部皮肤作为透过皮肤,计算24h累积透过百分率,将不同时间点的透过率与时间进行Higuchi方程拟合,求得透皮速率。结果显示,补骨脂素、异补骨脂素透过实验皮肤的24h累积透过率分别为：6.83%,3.81%,远远低于其24h累积释放率；平均透皮速率分别为：1.8674μg·cm-2·h-1, 0.6959μg·cm-2·h-1,亦远远低于它们的24h累积释放率。在各个时间点的透皮接收液中,均未检测出盐酸小檗碱。5.按照温性经筋通贴膏处方,分别制备缺冰片和氮酮的温性经筋通贴膏、缺冰片的温性经筋通贴膏、缺氮酮的温性经筋通贴膏,再参照温性经筋通贴膏透皮实验方法,考察缺冰片和氮酮的温性贴膏中补骨脂素、异补骨脂素24h累积透过百分率,并与含有处方量冰片和氮酮的温性经筋通贴膏相比,明确冰片和氮酮对它们透皮行为产生的影响。结果显示,在缺冰片和氮酮的贴膏中,补骨脂素的24 h累计透过百分率为0.92%,平均透皮速率是0.2483μg·cm-2·h-1,比温性经筋通贴膏的补骨脂素的透皮速率减少43.22倍；在缺冰片的贴膏中,补骨脂素的24 h累计透过百分率为1.13%,平均透皮速率是0.3006μg·cm-2·h-1,比温性经筋通贴膏的补骨脂素的透皮速率减少35.70倍；在缺氮酮的贴膏中,补骨脂素的24 h累计透过百分率为0.96%,平均透皮速率是0.2681μg·cm-2·h-1,比温性经筋通贴膏的补骨脂素的透皮速率减少40.03倍,在缺冰片或者氮酮的温性经筋通贴膏透皮接收液中均未检测出异补骨脂素。结论：1.本次研究建立的方中补骨脂、关黄柏、冰片、大黄、黄芪的薄层鉴别方法操作简便、专属性好,稳定性强,可用于温性经筋通贴膏的质量控制,建议列入该制剂质量标准正文。2.我们建立的可同时测定补骨脂素、异补骨脂素、盐酸小檗碱的HPLC方法,具有稳定、可靠、结果准确、重复性好等优点,可用于温性经筋通贴膏的含量控制,建议纳入该制剂质量标准。3.20%乙醇的生理盐水样品的拟合度最高,释放速率也相对较高,选作为接收液。通过温性经筋通贴膏体外释放的实验研究,我们得知补骨脂素、异补骨脂素、盐酸小檗碱均具有良好的自骨架释放至接收液的性能,24h累积释放率均在31.64%以上。4.透皮实验中补骨脂素、异补骨脂素透过实验皮肤的24h累积透过率为6.83%和3.81%,明显小于24h累积释放率,说明皮肤是经皮给药制剂进入体内发挥疗效的主要障碍。在透皮接收液中,未能检测出盐酸小檗碱,可能也与其理化性质有关,也或者由于该成分与皮肤亲和力较低所致。5.通过对缺冰片、氮酮的温性经筋通贴膏的透皮研究,我们发现,含有处方量冰片和氮酮贴膏比缺冰片和氮酮贴膏中补骨脂素和异补骨脂素的透皮速度和程度明显增加,说明冰片和氮酮对补骨脂素、异补骨脂素有明显的透皮促渗作用。盐酸小檗碱的24h累积释放率已达到31.64%,但在透皮实验中未能检测到盐酸小檗碱,说明冰片和氮酮对盐酸小檗碱未能产生与补骨脂素、异补骨脂素相同的促渗作用,以致盐酸小檗碱无法透过皮肤障碍到达接收液,所以未能检测得到。异补骨脂素的24h累积透过率为3.81%,但在对缺冰片、氮酮的温性经筋通贴膏的透皮研究中,在各个时间点均未能检测到异补骨脂素。