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蜂花粉是自然中存在的营养最丰富的的天然食品资源之一，油菜蜂花粉是我国最大宗的蜂花粉，我国油菜蜂花粉的年产量在300吨以上。油菜蜂花粉富含各种营养成分和活性物质如多糖、氨基酸、蛋白质、脂肪酸、黄酮类化合物等，具有治疗前列腺炎、抗肿瘤、保肝护肝、提高免疫力等多种生物活性，其功能性成分已经成为目前研究重点之一。本文以油菜蜂花粉为研究对象，对油菜蜂花粉进行了系统的分离纯化及细胞学筛选，对分离得到的保肝活性成分进行了保肝机理的分析，为油菜蜂花粉保肝活性开发提供了参考依据。1.油菜蜂花粉保肝活性成分的分离纯化。采用溶剂萃取、ODS柱层析、高效液相色谱法对油菜蜂花粉进行逐级分离纯化，最终得到四个黄酮醇苷P2P5以及一个含有P1和P2的混合组分C1，经质谱和核磁鉴定P2P5依次为：槲皮素3-O-β-D-葡萄糖-（2→1）-β-D-葡萄糖苷（QMP）、山奈酚3,4’-双-O-β-D-葡萄糖苷（KMG）、5,7,4’-三羟基-8-甲氧基黄酮醇-3-O-β-D-槐糖苷（SMP）、山奈酚3-O-β-D-葡萄糖-（2→1）-β-D-葡萄糖苷（KMP），其中5,7,4’-三羟基-8-甲氧基黄酮醇-3-O-β-D-槐糖苷（SMP）属首次从油菜花粉中分离得到。2.油菜蜂花粉保肝活性成分的细胞学筛选。以四氯化碳（CCl4）诱导人正常肝细胞（L-02）建立体外细胞损伤模型，采用MTT法（噻唑兰比色分析法）测定细胞存活率并以其作为活性筛选指标，对油菜蜂花粉各组分进行细胞学筛选。结果表明体外细胞损伤模型的造模浓度以10mM的CCl4为佳，分级萃取物中正丁醇萃取物活性最高，对其进行层析分离，各洗脱组分中A2活性最高，100μg/mL和200μg/mL剂量组细胞存活率分别为模型组的2.41倍和2.03倍，定性分析显示为黄酮醇苷类物质；组分A2经进一步分离纯化及细胞学筛选最终得到一个活性化合物QMP和一个活性组分C1，两者的保肝活性与剂量呈正相关，其中高剂量组即200μg/mL组细胞相对存活率分别为模型组的2.64和2.66倍。化合物KMP、KMG在体外四氯化碳肝损伤细胞模型中无保肝活性，化合物SMP的活性有待考察。3.黄酮醇苷及其苷元的构效关系。为了考察QMP、槲皮素、山奈酚的保肝活性，以不同浓度的QMP、槲皮素、山奈酚干预四氯化碳致损的肝细胞，测定了三者的IC50值。结果表明槲皮素对四氯化碳诱导损伤的肝细胞的保护效果最好，其IC50值为70.28μM；山奈酚和QMP次之，IC50值分别为102.26μM和132.64μM。QMP、KMP、KMG羟基糖基化使得其活性低于自身苷元，黄酮醇C3’-OH的强电离能力使得槲皮素表现出比山奈酚更强的保肝活性。4.活性成分保肝机理研究。以SOD、MDA、LDH作为指标从氧化应激的角度考察了QMP、山奈酚、槲皮素的保肝机理。结果显示，活性化合物QMP及黄酮醇苷元山奈酚、槲皮素的干预可极大的减轻四氯化碳致损肝细胞的脂质过氧化水平，脂质过氧化产物丙二醛MDA含量降低；胞内抗氧化体系活力增强，SOD活力升高；细胞膜稳定性增强使得LDH漏出率下降，说明化合物QMP、槲皮素、山奈酚对四氯化碳引起的氧化损伤具有显著的保护作用。