论文部分内容阅读
目的:1应用大通量的基因芯片技术,分析转染NOR1基因对肝癌细胞系HepG2基因表达谱的影响。2探索NOR1基因对HepG2细胞E-选择素表达水平的影响。方法:1同时培养pcDNA3.1（+）/NOR1-HepG2（HepG2-NOR1）（实验组）、pcDNA3.1（+）-HepG2（HepG2-pc）（对照组）和HepG2（空白组）细胞,扩大培养后提取细胞总RNA,用逆转录PCR（RT-PCR）对NOR1基因的表达进行鉴定。2选择生长良好的实验组与对照组培养细胞,分别提取mRNA,逆转录成cDNA,用人17K基因表达谱芯片对实验组和对照组细胞基因组进行表达分析,统计表达差异在2倍以上的基因。3 FQ-PCR、RT-PCR对芯片检测的E-选择素基因进行进一步验证,同时用ELISA试剂盒检测细胞培养上清液中E-选择素的水平。结果:1 RT-PCR结果显示实验组NOR1基因表达明显高于对照组,表明pcDNA3.1（+）/NOR1能在HepG2细胞中表达。2人17K基因表达谱芯片检测显示实验组与对照组比较有162个基因（或EST）表达差异在2倍以上,其中59条表达上调、103条表达下调,涉及细胞凋亡或肿瘤相关、细胞周期、转录调控、信号传导、翻译调控等基因。其中E-选择素基因Cy3/Cy5=2.152＞2.0,表达上调。3 RT-PCR、FQ-PCR对E-选择素基因检测,实验组的表达量分别为对照组的3.756和3.548,与芯片检测结果相符。cDNA基因芯片和FQ-PCR、RT-PCR都是研究差异表达基因的有力方法,基因芯片筛选基因表达谱具有高通量大规模的特点,而FQ-PCR、RT-PCR则适合单个基因表达变化的研究,两者互为补充和印证。4 ELISA检测细胞培养上清液中E-选择素的蛋白表达水平,结果表明转染了NOR1基因实验组E-选择素的表达水平明显高于转染空载体对照组（P＜0.01）和空白组（P＜0.01）,而转染空载体对照组和空白组无显著差异（P＞0.05）。结论:1转染pcDNA3.1（+）-NOR1后肝癌细胞的基因表达谱发生改变,实验组与对照组比较有162个基因（或EST）表达差异在2倍以上,其中59条表达上调、103条下调,涉及细胞凋亡或肿瘤相关、细胞周期、转录调控、信号传导、翻译调控等基因。NOR1基因可能是与肝癌相关的抑瘤基因侯选者之一。基因芯片技术为大规模筛选疾病相关基因及各基因间相互作用提供了可能。2经RT-PCR、FQ-PCR检测,E-选择素基因在实验组与对照组的表达差异与芯片结果基本一致,分别为3.756和3.548,与芯片检测结果相符。3 ELISA检测细胞培养上清液中E-选择素的表达水平,结果表明转染了NOR1基因实验组E-选择素的表达水平明显高于转染空载体对照组（P＜0.01）和空白组（P＜0.01）,而转染空载体对照组和空白组无显著差异（P＞0.05）。以上结果将为进一步系统研究NOR1基因的功能及其在肝癌发生中的可能机制提供了探索的方向。