短裸甲藻毒素(BTX)是脂溶性海洋毒素,主要是由短裸甲藻产生并且能够在海产品中存在比较长的时间而不会及时分解。该毒素能随着食物链传递而到人类身上,会对人们的健康造成巨大的影响。BTX在世界范围内分布广泛,因此快速检测BTX的方法的研究有重要意义,对于以后我国进出口的贝类产品检测都有很大的指导意义。本实验以短裸甲藻毒素1(BTX-1)作为研究对象来筛选单克隆抗体并建立BTX-1的免疫学检测方法。用混合酸酐法将BTX-1分别偶联到两种载体蛋白鸡卵清白蛋白(OVA)和牛血清白蛋白(BSA)。以BTX-1-OVA为免疫原,用BTX-1-BSA作为检测原。小鼠血清效价超过1:8000时,取小鼠脾细胞进行细胞融合,经过四次亚克隆最终筛选到一株能稳定分泌抗BTX-1的单克隆抗体的细胞株,命名为6C6。该抗体亚型为IgG1型,亲和力常数为1.055×108L/mol,与其它载体蛋白以及其他类别的海洋毒素没有交叉反应。用辛酸硫酸铵法纯化腹水到高纯度抗体,抗体的效价达到1:32000。确立了 ELISA反应的最佳体系,绘制标准曲线的方程式为y=0.08779+0.011127/[1+(x/58.00982)^1.58278],R2 为 0.98078,IC50 为58 ng/mL,线性范围曲线的检测范围在25-208 ng/mL,最低检测浓度为14ng/mL。通过模拟实际样品的测定样品回收率高,并且变异系数系数都小于5%,所以可以利用该单克隆抗体制作用于检测BTX-1的ELISA试剂盒。基于该抗体发展的胶体金试剂条的的灵敏度为200 ng/mL,且特异性强,检测速度快。本实验筛选到的单抗以及基于该单抗建立起来的ELISA检测方法和胶体金试纸条,对海洋生物毒素和病原物的检测方面具有重要的指导意义和应用价值,对食品安全的快速检测及其监控防范方面都具有很好的参考价值。