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MDR(multidrug resistance)是指肿瘤细胞对多种结构和作用位点不同的化疗药物具有抗性的现象.MDR是目前临床癌症化疗失败的主要原因之一.MDR与多种因素相关,其中包括:1)质膜中耐药蛋白表达水平的改变(例如P-gp,MRP1,LRP等);2)质膜中磷脂组分和质膜物理性质的改变;(3)胞吞与胞吐速率的改变;4)胞质以及细胞器中离子浓度(H<+>,Ca<2+>等)的改变,等等.该论文主要从表达MRP1的BHK细胞中纯化MRP1并对其活性和构象变化及其与化疗药物的相互作用进行了较系统、深入的研究.同时,对抗顺铂的人肺腺癌A549/DDP细胞的顺铂耐药机理进行了进一步探讨,取得的主要研究结果如下.1.MRP1的表达,纯化和鉴定.用逐步改变CHAPS/蛋白比例的方法增溶转染了MRP1cDNA的BHK细胞的细胞膜.获得部分纯化的MRP1,再经组氨酸亲和层析His.Bind Resin获得纯化的MRP1.2.磷脂和化疗药物对MRP1 ATPase活性的影响.各种化疗药物对纯化的MRP1的ATP酶活性具有不同的影响,进一步对纯化的MRP1的色氨酸内源荧光淬灭实验结果表明,不同化疗药物对MRP1的酶活性影响的差别与其诱导MRP1呈现的不同的构象相关.3.MIANS对MRP1Cys的标记位点靠近NBDs.用特异性标记巯基的荧光探针MIANS标记MRP1的实验结果表明,MIANS可标记MRP1中的两上半胱氨酸残基.4.重组MRP1的NBD-PC翻转酶活性.将MRP1重组于大豆磷脂和磷脂酰胆碱(PC)的荧光类似物NBD-PC所形成的脂质体中.5.胞内pH的变化与人肺腺癌A549/DDP细胞的顺铂耐药性.用荧光探针BCECF-AM测定对顺铂敏感的A549细胞和抗顺铂的A549/DDP细胞内的pH(pHi)分别为是7.1和7.4.通过改变培养箱中二氧化碳的浓度来模拟生理条件下的pHi改变.6.膜脂改变与A549/DDP细胞的顺铂抗性的NMR研究.用临床用药剂量的顺铂(30μM)处理A549和A549/DDP细胞,在培养48小时期间二者表现明显不同的凋亡特性.