经典Wnt信号通路对BMP9诱导干细胞骨向分化的影响及机制研究

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目的:探讨经典Wnt信号通路与骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein9,BMP9)诱导小鼠间充质干细胞C3H10T1/2细胞骨向分化的相互影响及分子机制。方法:1、以小鼠间充质干细胞C3H10T1/2为目的细胞,根据不同的处理因素将其分为4个组:GFP组、BMP9组、Wnt3a组、BMP9+Wnt3a组;2、通过染色和定量测定早期成骨标志碱性磷酸酶(ALP)的活性;3、应用Western blotting、Q-PCR检测晚期成骨标志骨钙蛋白(OC)、骨桥蛋白(OPN)的表达;4、应用茜素红染色检测钙盐沉积的情况;5、应用Western blotting、Q-PCR检测成骨转录因子Runx2的表达;6、应用异位成骨动物模型进行进一步验证二者对干细胞成骨分化的相互影响。结果:1、在加入处理因素后第7天进行ALP染色和活性测定,发现Wnt3a+BMP9组的ALP活性比BMP9组、Wnt3a组明显增高(P<0.01)。2、第14天进行茜素红染色观测钙盐沉积,结果发现从大体标本可以看到从GFP组、Wnt3a组、BMP9组、BMP9+Wnt3a组颜色有递增的趋势,镜下发现BMP9+Wnt3a组的钙盐结节要明显多于BMP9组、Wnt3a组。3、在第9天应用Western blotting和Q-PCR检测OC、OPN的表达,结果发现OC和OPN的表达在BMP9+Wnt3a组高于BMP9组和Wnt3a组。4、在第2天应用Western blotting和Q-PCR检测Runx2的表达,结果发现Runx2在BMP9+Wnt3a组中的表达要高于BMP9组和Wnt3a组5、动物体内接种4W后取出异位成骨的骨块,观测大体标本以及进行HE、Masson染色,结果显示BMP9+Wnt3a组的骨块大于BMP9组和Wnt3a组(P<0.05),通过HE、Masson染色发现BMP9+Wnt3a组的骨块比BMP9组和Wnt3a组的成熟度高。结论:Wnt3a促进了BMP9诱导的小鼠间充质干细胞C3H10T1/2的骨向分化,其中成骨关键基因Runx2可能作为二者的交汇点起了重要作用。
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