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目的:通过动物体外实验探讨乙醇对成骨细胞凋亡的影响。从成骨细胞增殖、分化及细胞凋亡方面,多层次证实乙醇能引起成骨细胞凋亡,为寻求预防和治疗乙醇引起骨损害的途径提供了理论依据。方法:1.采用体外培养新生大鼠顶骨的成骨细胞作为细胞模型,实验分为对照组和乙醇组,对照组采用含10%FBS的1640培养液培养;乙醇组在对照组正常培养1d后,加入100mM乙醇的10%FBS的1640培养液,干预成骨细胞凋亡。取第3代成骨细胞按实验分组,分别在96孔板、12孔板和6孔板中培养细胞,每48h换一次液。2.于乙醇作用后1、3、5、7d进行形态学观察;使用MTT方法进行成骨细胞增殖的检测;3.于乙醇作用后3、7、10、14d进行成骨细胞分化指标检测:采用ELISA试剂盒按照相关说明书进行骨碱性磷酸酶和骨钙素的检测4.于乙醇作用后3、7、10、14d采用RT-PCR方法进行成骨细胞凋亡相关基因Bcl-2、BaxmRNA表达的检测;5.于乙醇作用1d采用流式细胞仪对成骨细胞凋亡进行检测。结果:1.成骨细胞增殖的检测:随着培养时间的延长,对照组的成骨细胞增殖逐渐增强,第5、7d细胞增殖与第1、3d比较呈显著差异(P<0.05);而乙醇组的成骨细胞增殖逐渐减弱,第5、7d细胞与第1、3d比较增殖明显减弱,有显著性差异(P<0.05)。同期比较,乙醇组细胞增殖显著低于对照组(P<0.05)。2.成骨细胞分化指标检测:对照组第3、7、10、14d细胞ALP、BGP含量随培养时间的延长而显著升高(P<0.05);乙醇组第3、7、10、14d细胞ALP、BGP含量随培养时间的延长显著降低(P<0.05)。同期比较,乙醇组细胞ALP、BGP含量显著低于对照组(p<0.05)。3.成骨细胞凋亡基因的检测:与对照组比较,成骨细胞经1OOmM乙醇干预培养3、7、10、14d后,Bcl-2 mRNA相对表达量逐渐降低,BaxmRNA相对表达量逐渐增高。4.成骨细胞凋亡的检测:流式细胞仪分析,对照组成骨细胞自发性凋亡率为1.89%±0.63%;乙醇组1d凋亡率为2.94%±0.91%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1.经乙醇干预后的成骨细胞增殖、分化明显减弱。2.乙醇可诱导成骨细胞凋亡。