论文部分内容阅读
反义技术是目前癌症治疗领域很重要的一门技术。与传统的化学疗法相比,反义疗法毒副作用更小,因为在治疗过程中反义药物能选择性地进入癌细胞,而有效地保护了正常细胞。其原理是反义核苷酸能与特定序列互补目标mRNA结合,从而阻止了目标基因表达。反义核苷酸就是这样一种能阻止目标基因表达并导致肿瘤细胞凋亡的有效试剂。运用磁性纳米粒子靶向给药越来越引起人们的兴趣,磁性纳米粒子作为载体把抗癌药物定向输送到致癌部位,在临床诊断和治疗方面有巨大潜力,正是基于这样一种想法而建立起来的一种复合型纳米靶向给药系统。本文建立一种有效的磁性靶向给药系统——磁性纳米粒子-反义核苷酸复合物,并用该复合物诱导HL-60细胞凋亡,用AFM等对HL-60细胞凋亡进行可视化研究,主要做了以下工作。1.通过不同种类纳米粒子的量-效实验、时-效实验、径-效实验来确定现有实验条件下那些纳米粒子具有细胞毒性,哪些纳米粒子对细胞是安全的,并找出安全的时间及浓度范围,为下一个阶段的纳米粒子-基因药物复合物诱导HL-60细胞实验做准备。2.在磁性纳米粒子表面包裹硅,制备磁性纳米粒子-反义核苷酸复合物,用该复合物诱导HL-60细胞,并做了量-效实验及时-效实验,MTT检测,并用TEM、AFM、荧光显微镜、流式细胞仪等定量、定性地表征细胞凋亡。在表征细胞凋亡的手段上,我们探索了一种新型的表征方法:即用原子力学显微镜磁扫描观察细胞凋亡。同时还运用TEM、荧光显微镜等观察细胞凋亡,使细胞的凋亡形貌变得可视化。流式细胞仪等定量地测定细胞凋亡率,是可视化观察的有力补充;用超顺磁性纳米粒子做载体将大大提高反义寡聚核苷酸对HL-60细胞的转染率。从而较大程度上提高了细胞的凋亡率;超顺磁性纳米粒子做载体用于反义治疗,为反义疗法提供了一种新的思路,且超顺磁性纳米粒子由特殊的磁性,在临床应用中可以实施靶向治疗,反义靶向疗法将成为治疗肿瘤的有效方法之一。