论文部分内容阅读
铁皮石斛(Dendrobium candidium Wall.Ex Lindl.)是一种多年生附生兰科(Orchidaceae)植物,是我国传统名贵中药,主要分布于浙江、广西、云南、湖南、贵州等地。铁皮石斛含有多糖、生物碱、氨基酸、微量元素等及一些结构新颖的化合物,具有很高的药用价值和经济价值。本文对铁皮石斛再生体系进行了系统而全面研究,对组培苗和野生苗间采用RPAD分子标记进行分析,以期建立系统的方法,为铁皮石斛药用价值的开发利用提供了重要的科学依据。主要研究结果如下:1、铁皮石斛再生体系建立(1)外植体的消毒:根蔸以70%的酒精处理30s,然后用0.2%的升汞灭菌7min效果最佳,无菌外植体得率可达89%;茎段以70%的酒精浸泡20s,然后用0.2%的升汞灭菌3min菌效果最好,无菌外植体得率可达91.1%。(2)愈伤组织诱导培养:MS+6-BAO.5mg/L+NAAO.1mg/L+2,4-D1.Omg/L+蔗糖30g/L+琼脂7.5g/L,根蔸诱导率93.33%;茎段诱导率95.56%。(3)增殖培养:MS+6-BA0.5mg/L+IBA1.Omg/L+KT1.Omg/L+Agar7.5g/L愈伤组织生长快,经过30d培养,增殖系数为4.3。(4)分化培养:1/2MS+NAA0.5mg/L+6-BA1.Omg/L+香蕉汁50g/L+Agar7.5g/L+蔗糖30g/L,分化率97.78%。(5)生根培养:1/2MS+NAAO.5mg/L+琼脂7.5g/L+蔗糖30g/L+10%香蕉汁,生根率99%。(6)炼苗移栽:移栽到1/3腐殖质+1/3苔藓+1/3花生壳的基质中成活率高,为96.9%。2、再生植株遗传稳定性的RAPD分析采用RAPD分子标记技术对再生植株与野生植株进行遗传稳定性分析,结果表明:再生植株与野生植株在DNA水平上发生了一定程度变异,其变异百分数为3.33%,同时,组培苗之间也存在这种变异,变异百分数为2.08%。