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金葡菌肠毒素(Staphylococcal Enterotoxin, SE)是引起人类食物中毒和葡萄球菌胃肠炎的主要原因。SE共有18个基因类型，不同SE基因的检出率与菌株分离地域和宿主来源有关。针对合肥地区乳源金葡菌肠毒素基因型分布状况尚不清楚的现状，本研究在采用PCR方法检测56株合肥分离株10种SE基因，确定其主要基因型的基础上，利用大肠杆菌原核表达系统成功表达了主要肠毒素SEA和SEG蛋白，并制备了其特异性抗体。研究结果为进一步建立金葡菌肠毒素的免疫学检（监）测方法奠定了基础，对保障乳制品的安全，防止SE食物中毒具有一定指导意义。为了明确合肥地区乳源金葡菌肠毒素基因型的分布状况，根据GenBank中收录的各型SE基因序列(SEA、SEB、SEC、SED、SEE、SEG、SEH、SEI、SEM和SEN)，设计10对特异性引物，对56株乳源金葡菌合肥分离株进行10种SE基因PCR检测。结果显示56株测试菌中有53株携带SE基因，总携带率为94.64%，各型肠毒素基因的携带率分别为SEA41.07%、SEB16.07%、SEC19.64%、SED3.57%、SEG91.07%、SEH5.36%、SEI17.86%、SEM5.36%和SEN24.43%，未检测到SEE基因。SE阳性菌株可同时携带两种或两种以上的SE基因，共组成49种肠毒素基因型，但以SEA-SEG为其主要肠毒素基因型。结果提示，应建立一种敏感、快速和特异的免疫学方法，加强对合肥地区原料乳中SEA和SEG的检（监）测。为了获得SEA和SEG蛋白检测原和免疫原，根据金葡菌ATCC25923的SEA和SEG基因序列，设计2对特异性引物，PCR扩增出全长SEA基因(774bp)和切除信号肽的SEG基因(702bp)。分别将PCR扩增产物克隆至pAML-c4X质粒，构建出原核表达重组质粒pAML-c4X-SEA和pAML-c4X-SEG。诱导表达的可溶性重组蛋白经亲和层析柱纯化后，得到纯度分别为98.32%和97.69%、浓度分别为1.0mg/mL和1.5mg/mL的重组SEA和SEG蛋白，它们均满足作为检测原和免疫原的要求。为了制备SEA和SEG蛋白检测抗体，将纯化的重组SEA和SEG蛋白分别与双相乳化佐剂充分乳化制成免疫原，分别免疫家兔，二次免疫后第14天抗SEA抗体的ELISA效价和琼扩效价分别高达1:6553600和1:64，抗SEG抗体的ELISA效价和琼扩效价分别高达1:3276800和1:32，它们纯化后均可作为检测抗体使用。