抗生素在临床上的不合理或不正当使用导致细菌耐药问题日益严峻。对细菌耐药性进行监测是有效控制耐药性和指导临床合理用药的基础,而制定耐药性判定标准是规范耐药性监测的必要条件。美国、欧盟以及日本等发达国家都制定了一系列细菌耐药判定和检测标准。我国主要参考的是美国CLSI中的标准。然而我国细菌耐药程度与美国细菌耐药程度并不完全一致,故我国迫切需要制定适合我国耐药性情现状的耐药判定标准。作为一种重要的人畜共患菌,沙门菌对氟喹诺酮类药物的耐药性在我国日益突出,然而猪源沙门菌恩诺沙星的耐药性判定却无标准可依,因此建立猪源沙门菌恩诺沙星的折点值对耐药性监测和临床用药具有重要的指导意义。本课题参考美国CLSI,欧盟EUCAST等标准规定的方法方法,建立了猪沙门菌恩诺沙星野生型折点和药效学折点。1猪沙门菌恩诺沙星的野生型折点值(COWT)本研究使用科玛嘉显色培养基和PCR方法对230株猪源病原菌进行特异性鉴定。230株猪源病原菌接种到科玛嘉显色培养基,挑取紫色菌落,初步鉴定出214株猪源沙门菌,再用特异性基因invA进行PCR特异性检测,最终确定214株病原菌全为猪源沙门菌。用非线性回归法制定野生型折点值。采用CLSI中规定的琼脂稀释法测定恩诺杀星对猪源沙门菌的最低抑菌浓度(MIC)。绘制MIC柱状分布图,其中野生型菌株的MIC柱状图符合以二为底的对数正态分布。用SigmaStat3.5软件根据非线性回归分析方法测定野生型菌株的MIC对数正态分布数据,选择与实际测得的菌株总数差异最小的MIC分布作为野生型菌株MIC分布。根据相关规定,95%野生型菌株的MIC即为野生型折点值。结果表明,当MIC的取值范围在0.125-4μg/mL寸,野生型菌株共有183株,与实际测得的182株菌只相差一株菌,差异最小。另外31株菌为耐药性猪沙门氏菌,耐药率为14.5%。根据野生型MIC柱状图测得的猪沙门氏菌对恩诺沙星的野生型折点为≤2μg/ml,包括了100%的野生型猪源沙门氏菌。2猪沙门菌恩诺沙星药效学折点值(COPD)用高效液相法测定猪血浆中的药时数据。选取12头3月龄健康猪,0.5mL/kg臀部肌肉注射恩诺沙星溶液。取不同时间点的血浆进行检测。检测方法为血浆用乙腈处理后,用反相高效色谱法测定恩诺沙星的浓度,选择的流动相是10%甲醇,10%乙腈,0.03M乙酸铵和0.02M柠檬酸。之后,用3p97软件分析药动学数据,结果表明,药时数据符合一室吸收模型。只有处于游离状态的药物才具有活性,与蛋白结合的药物会影响到活性药物浓度,因而本课题用透析法测定了恩诺沙星在猪血浆中的蛋白结合率。结果表明,药物浓度与血浆蛋白结合率的关系较大,200μg/ml-2000μg/ml的蛋白结合率范围为41.4%-56.6%。用Monte Carlo模拟方法制定药效学折点值。AUC0-24/MIC是猪沙门菌恩诺沙星药效学折点的有效参数,用Crystal Ball软件得出不同AUC0-24/MIC与MIC取值的累积百分率。当AUC0-24/MIC为125,相临两个MIC值差异较大时,取前一个MIC值作为药效学折点值。结果表明,猪沙门菌恩诺沙星的药效学折点为≤1μg/mL。根据CLSI相关规定,当缺乏临床型折点值时,测定的药效学折点值即为敏感性折点值。所以本研究制定出的猪源沙门氏菌对恩诺沙星的敏感性折点值为≤1μg/ml。综上所述,本课题参考了CLSI中规定的标准方法,制定出了猪沙门菌恩诺沙星的野生型折点和药效学折点,并根据CLSI相关规定制定出了猪沙门菌恩诺沙星的敏感性折点值。根据该折点值可以评价恩诺沙星对猪沙门菌的敏感性,为猪沙门菌的耐药监测提供理论依据,指导恩诺沙星在临床上的合理使用。