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阿尔茨海默症（Alzheimer’s disease,AD）是神经退行性疾病的一种,以认知和记忆功能进行性恶化为主要临床表现,涉及语言、记忆、理解、注意力、判断和推理等行为障碍。随着病情的进展,患者的执行能力下降,最终丧失日常生活能力。AD发病机制Aβ（Amyloid-β,Aβ）假说认为,正常情况下,大脑中Aβ浓度平衡调节主要是由其自身产生和清除来进行的,这种平衡如果被破坏,则Aβ在脑内就会发生聚集和沉积,导致神经元变性以及坏死。因此,Aβ假说被认为是目前的主流假说之一。当前用于治疗AD的药物,只能有限的改善AD的症状,不能治愈或逆转AD的发生,且治疗达不到预期的效果。所以,AD已经成为21世纪严重危害人类健康的疾病之一。为此,研究AD的发病机制,开发有效治疗AD的药物已成为临床医学研究的热点。本研究以AD模型秀丽线虫（Caenorhabditis elegans,C.elegans）CL4176为研究对象,探究大麻二酚（Cannabidiol,CBD）对AD模型秀丽线虫体内Aβ蛋白聚集的影响,研究CBD对Aβ蛋白聚集影响的作用机制,为大麻素类药物用于治疗AD提供理论参考和临床应用的依据。1.大麻二酚对秀丽线虫行为表型的影响使用CBD不同浓度梯度（50、100、400μmol/L）作用Aβ转基因秀丽线虫CL4176,对其瘫痪率进行统计分析。实验结果表明,不同浓度的CBD都可以缓解线虫瘫痪表型,最有效降低线虫瘫痪率的浓度为100μmol/L。为此,选用100μmol/L CBD处理CL4176品系线虫,进一步对其寿命、吞咽次数和虫体弯曲次数进行统计分析。实验结果显示,浓度为100μmol/L的CBD对其寿命没有显著影响,但可以提升CL4176品系线虫的吞咽次数和身体弯曲次数。2.大麻二酚对Aβ蛋白聚集拮抗作用的研究将100μmol/L CBD作用于Aβ1-42肽段,利用蛋白质圆二色谱实验（Circular dichroism,CD）检测CBD对Aβ1-42肽段聚集的拮抗作用。通过CD法检测190-250 nm的Aβ1-42肽段光谱的变化,证实CBD在体外不具有直接拮抗Aβ1-42肽段聚集的能力。选用100μmol/L的CBD作用Aβ转基因秀丽线虫CL4176,对CL4176线虫体内的Aβ蛋白进行β淀粉样蛋白荧光染色,实验结果表明CBD能明显减少CL4176线虫体内Aβ蛋白的聚集程度。同样实验条件下,对CL4176线虫体内的Aβ蛋白进行免疫印迹（Western blot）检测,CBD处理能够降低线虫CL4176体内Aβ1-42蛋白表达量,实验进一步证实CBD可以减缓由Aβ蛋白毒性引起的AD症状。3.大麻二酚对Aβ蛋白聚集作用机制的研究植物衍生的多酚通常是抗氧化剂,利用DPPH法和ABTS法体外测定CBD及其CBD-M1（含有一个酚羟基和一个酚羟基甲基化的CBD衍生物）和CBD-M2（含有两个酚羟基甲基化的CBD衍生物）的抗氧化能力,发现随着酚羟基被取代数目的增加,其抗氧化能力也随之减弱,初步证实CBD抗氧化能力是由其自身具有的酚羟基结构决定的。以DCFH-DA为荧光探针,将CBD作用于野生型线虫N2,检测线虫体内ROS含量,实验结果表明,CBD可以使野生型线虫N2体内ROS含量降低,表明CBD在野生型线虫N2体内具有抗氧化能力。通过实时荧光定量PCR（q-PCR）检测野生型线虫N2体内过氧化氢酶相关基因（ctl-1、ctl-2、ctl-3）、超氧化物歧化酶相关基因（sod-1、sod-2、sod-3、sod-4）、谷胱甘肽s转移酶（gcs-1、gst-10、gst-20）的m RNA表达水平,结果发现,CBD不能影响上述基因表达。DAF-16和SKN-1是参与预防氧化应激的主要转录因子,为了研究CBD在体内的抗氧化途径,选用秀丽线虫daf-16突变体（CF1038）和skn-1突变体（EU1）,以正常野生型线虫N2作为对照,在胡桃醌诱导氧化应激后,发现CBD均可以提高秀丽线虫daf-16突变体、skn-1突变体和野生型线虫N2的存活率,由此可以说明CBD在体内抗氧化活性不是由daf-16以及skn-1介导的。选用100μmol/L CBD及其衍生物CBD-M1和CBD-M2处理Aβ转基因秀丽线虫CL4176,进行硫磺素S荧光（Thioflavine S,Th S）染色实验,通过Th S染色可以观察到CBD处理的CL4176的头部区域Aβ沉积明显减少,而CBD-M1和CBD-M2处理的CL4176的头部区域Aβ沉积有减少的趋势,但不如CBD减少明显,说明随着酚羟基被取代的数目逐渐增加,其缓解Aβ沉积的能力是逐渐下降的。同样条件下对Aβ转基因线虫CL4176进行瘫痪实验,CBD处理组可以显著降低Aβ转基因秀丽线虫CL4176的瘫痪率（P＜0.01）,随着酚羟基被取代数目的增加,CBD-M1和CBD-M2降低线虫瘫痪率的能力逐渐下降。综上所述,CBD的酚羟基对于在体外和体内清除ROS、减轻Aβ在线虫体内的聚集以及改善线虫体内与Aβ相关的神经毒性至关重要。