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透明质酸酶(Hyaluronidase, HAase)是具有降解透明质酸(Hyaluronid acid, HA)活性的一类酶的总称。HAase可通过作用于β-1,3或β-1,4糖苷键将透明质酸降解为低分子量透明质酸(LMHA)或寡聚透明质酸(O-HA)。LMHA和O-HA在食品、化妆品、医药上有着广泛的应用,但目前LMHA和O-HA的制备方法仍有待完善。本研究通过对GenBank中细菌来源的透明质酸酶的基因序列进行比对,设计PCR扩增引物,以兽疫链球菌MF002基因组DNA为模板通过PCR得到透明质酸酶的编码基因hyl,该基因全长为2589bp, GenBank登录号为KP661598。将得到的hyl插入温敏型载体pBLMVL2,并转化大肠杆菌BL21,得到表达重组兽疫链球菌透明质酸酶的重组菌MF105。升温诱导实验和SDS-PAGE分析结果表明,重组蛋白的相对分子量约9.7x 104Da,最适诱导表达温度为41.5℃。经过包涵体复性等步骤获得的粗酶液具有透明质酸水解活性,最适反应温度为37℃,最适反应pH值为5.5,且在Ca2+、Mg2+、Co2+存在的情况下对HAase的酶活有促进作用。在其最适条件下检测,HAase的酶活最高达到6.28×105U/mg, HA平均分子量在75min内从1.6×106Da降解至104Da。该研究结果为LMHA和O-HA的生产提供了一个温和高效的方法。为克服常规基因工程方法生产HAase纯化过程复杂,纯化后酶的利用效率低,产物LMHA和O-HA分离步骤繁琐等不足,本研究进一步利用冰晶核蛋白作为载体蛋白,构建HAase表面展示体系,旨在将HAase展示于细菌细胞表面直接与底物HA反应,制备LMHA和O-HA。通过将负责跨膜、转运和锚定的冰核蛋白N端结构域的编码DNA序列inaq-n与hyl融合,插入温敏型载体pBLMVL2,并转化大肠杆菌BL21,得到温敏型表面展示HAase的大肠杆菌重组菌MF106。对MF106升温诱导,将诱导后重组菌与溶液中HA反应。HA平均分子量在3h内从1.6×106Da降至7.4×104Da,其最适酶解条件为37℃,pH6.0。研究结果表明该表面展示体系可作为全细胞催化反应器直接降解HA。该方法省掉HAase纯化步骤,且可反复使用,为LMHA生产提供了一种更为简单的新方法。