2001年chen等人发现了一种新的A型流感病毒蛋白—PB1-F2,该蛋白被认为是A型流感病毒重要的毒力因子之一。大量的研究显示PB1-F2蛋白在宿主细胞中具有多效性,PB1-F2定位于线粒体上并诱导细胞凋亡;可促进宿主继发性细菌感染;能增强病毒聚合酶的活性。凋亡调节因子1(modulator of apoptosis 1,MOAP-1)在细胞线粒体中可与Bax相互作用,当在哺乳动物细胞中过表达时,能够引发细胞凋亡。目前,关于PB1-F2与宿主蛋白相互作用引发宿主细胞线粒体调亡的分子机制尚不是十分清楚。本研究利用293T细胞提取总RNA并成功扩增了 MOAP-1基因,然后将MOAP-1基因构建到诱饵载体pACT2上。将实验室已有的pGBKT7-PBl-F2和新构建好的pACT2-MOAP-1载体分别转化到酵母细胞中,再将两种酵母菌液16℃条件融合24h左右,融合后利用缺陷性培养基进行单克隆筛选,成功地筛选出了阳性克隆。同时利用酵母双杂交回转实验和半乳糖苷酶活性实验,对阳性克隆做进一步验证。为了进一步确证PB1-F2与MOAP-1存在相互作用,构建了 MOAP-1基因的多种原核和真核表达载体,并通过GST pull-down、免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)和激光共聚焦方法验证PB1-F2与MOAP-1在体内和体外也能发生相互作用。为了探究二者相互作用对MOAP-1蛋白功能的影响。将长势良好的HeLa和293T细胞铺在六孔板中,转染不同量的PB1-F2与MOAP-1真核表达载体。由于MOAP-1在宿主细胞中的表达量很低,用Western blot技术并不能检测到该蛋白的存在,在转染一段时间后向转染的细胞中加入蛋白酶抑制剂,增强了两种蛋白的稳定性,这样通过Western blot技术可检测到宿主细胞中两种蛋白的表达情况,结果表明PB1-F2蛋白可以增强MOAP-1蛋白的稳定性,并且PB1-F2上调MOAP-1在细胞中的表达量。本实验验证了 A型流感病毒PB1-F2蛋白与宿主MOAP-1的相互作用,并且PB1-F2上调MOAP-1在细胞中的表达量,为进一步了解PB1-F2诱导宿主细胞线粒体途径凋亡的分子机制提供了依据;为发现PB1-F2在宿主细胞中的新功能提供了线索;为深入研究A型流感病毒的致病机理及流感病毒的预防和治疗奠定了理论基础。